文档介绍：基因工程药物
--干扰素的制备
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1 什么是干扰素
概念(interferon,IFN)：机体免疫细胞产生的一类细胞因子，是机体受到病毒感染时，免疫细胞通过抗病毒应答反应而产生的一组结构类似、功能接近的生物调节蛋白。
根据分子结构和抗原性的差异分为α、β、γ、ω等4个类型。
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1. 根据来源、基因序列和氨基酸组成分类
◆ I 型干扰素：IFNα、IFNβ、IFN τ、IFN ω
来源：白细胞、成纤维细胞、病毒感染的组织细胞等
功能：抗病毒感染、抗肿瘤生长、免疫调节(较弱）其中IFN-α为多基因产物，有23种以上的亚型。
◆ II 型干扰素：干扰素γ（IFN)
来源：活化的T细胞和NK细胞产生
功能：免疫调节
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提高单核巨噬细胞、树突状细胞的抗原提呈能力增强Tc细胞和NK细胞的杀伤活性抑制TH2细胞形成，下调体液免疫应答趋化作用抗病毒和抗肿瘤作用（次要） 2. 根据动物来源确定分类人干扰素（HuIFN），小鼠干扰素（MuIFN）。
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不同来源的干扰素
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重组干扰素的临床应用
广谱抗病毒活性（rhuIFNα）
慢性乙型、丙型、丁型肝炎；疱疹、病毒性角膜炎。
直接抗肿瘤活性（rhuIFNα）
毛细胞和慢性髓样白血病、 Kaposi肉瘤、非霍奇金淋巴瘤。
免疫调节活性——治疗慢性肉芽肿瘤（rhuIFNγ）
多发性硬化症 rhuIFNβ
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2 基因工程大肠杆菌发酵生产工艺
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干扰素生产工艺路线
上市产品：重组人干扰素rhuIFN
1986，rhuIFNα-2a， rhuIFNα-2b；
1990，rhuIFNγ-1b；1993，rhuIFNβ-1b；
2001－2002： PEG化IFN，PEG-Intron, Pegasys
表达产物：无糖基化，N-met，无活性包涵体
工艺特点：发酵过程，随后变性、复性过程。
基因工程大肠杆菌发酵生产工艺:
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目的基因的分离
克隆载体
目的基因与克隆载体的体外重组
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重组体导入大肠杆菌K12
→
受体菌的培养及筛选
→
从受体菌中获取目的基因
表达载体
重组质粒
导入大肠杆菌
受体菌的筛选，表达性、稳定性等检测
工程菌
→
基因工程菌的制备
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一、目的基因的分离与扩增
1. 破碎细胞，用Trizol法提取总的RNA
2. 将生产干扰素的人白细胞的mRNA分级分离然后进行凝胶电泳切取目的基因片段
3. 用逆转录试剂盒逆转录，把总mRNA逆转录成cDNA
4. 以cDNA为模板、干扰素引物为引物，PCR，得到完全的干扰素基因的PCR产物
“粘性末端”
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