文档介绍：复旦大学
博士学位论文
骨髓间充质干细胞在治疗支气管哮喘中的作用研究
姓名:陶雪飞
申请学位级别:博士
专业:内科学(呼吸病学)
指导教师:王向东;朱蕾
2012-04-15
摘要目的⒙亚宓鞍字旅簦し⒎尾勘溆π匝字⑿∈竽P停=徊绞笛榇蛳禄教致亚宓鞍字旅簦し⑾∈蠓卧嗖±砑胺闻莨嘞匆南赴翁和分子生物学改变,初步分析哮喘变应性炎症的发病机制。方法只周龄雌性/∈笏婊治A阶椋孔唬笛樽橛τ寐清蛋白于第熘旅簦天激发小鼠,对照组用生理盐水。末次激发结束后小时处死小鼠,留取血清、肺脏病理、肺泡灌洗液、肺脏冰冻组织等标本,比较两组肺脏病理变化,及肺泡灌洗液内细胞计数和细胞分类计数。结果旅簦し⒆樾∈蠓卧嗖±碜橹Ц谋浞媳溆π匝字⒈硐帧胝6哉兆樾∈笙啾龋旅簦し⒆樾∈蟮腂邢赴苁灾龆啵赴分类计数结果表明嗜酸性粒细胞、淋巴细胞比例明显增多。旅簦し⒆樾∈驜脱=蠭水平明显升高,而猋水平显著下降。结论捎寐亚宓鞍字旅簦し⑿∈螅晒⒘诵∈笙P汀ü匝G寮胺闻莨嘞匆褐懈髦窒赴蜃拥牟舛ǎな迪庖呶陕依嘈褪疶比例失衡,赴龆嗉捌浞置诘母髦窒赴蜃釉谙姆⑸⒄中具有重要作用。关键词卵清蛋白/∈变应性炎症哮喘模型中图分类号//,复旦人学R窖г毫俅惨窖О四曛票弦德畚甌..
一叫兰口目前,大多数制作变应性炎症的动物模型最常用的是使用卵蛋白,国内目前使用的多数是卵蛋白致敏的哮喘动物模型,可以诱发速发相和迟发相的变态反应,容易致敏和产生气道炎症。在哮喘动物模型的动物选择上,国内外在实验中使用小鼠变应性疾病的模型越来越多。在致敏变应原的选择方面,除了卵清蛋白,也有人应用屋尘螨抗原S捎贖是哮喘患者常见的变应原,因此采用诱导的哮喘模型可能会更好地反映人体的哮喘情况。但是,国内使用盏嫉小鼠变应性炎症模型较少。本研究使用目自,际醣冉铣墒斓穆亚宓鞍字旅艉图し/螅菇亚宓鞍字旅簦し⑿∈蠓尾勘涮从π匝字⒌哪P停=疶,珺痗步的实验打下基础。‘瑃甌..瓾—.瑃琫甌一獃甒.,,
第一部分卵清蛋白致敏/激发小鼠肺部变应性炎症模型的建立复旦火学上海医学院临床医学八年制毕业论文
巾英文名词对照嗜酸性粒细胞白介素吲哚胺双加氧酶一氧化氮肺泡灌洗液撬杓涑渲矢上赴分化群改良嘌胎牛血清异硫氰酸荧光素流式细胞仪肝细胞生长因子免疫球蛋白白介素一干扰素一组织相容性复合体生理盐水卵清蛋白光密度传代—猋一’工疭抄工~镌箩/獂~
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一叫兰口目前,大多数制作变应性炎症的动物模型最常用的是使用卵蛋白,国内目前使用的多数是卵蛋白致敏的哮喘动物模型,可以诱发速发相和迟发相的变态反应,容易致敏和产生气道炎症。在哮喘动物模型的动物选择上,国内外在实验中使用小鼠变应性疾病的模型越来越多。在致敏变应原的选择方面,除了卵清蛋白,也有人应用屋尘螨抗原S捎贖是哮喘患者常见的变应原,因此采用诱导的哮喘模型可能会更好地反映人体的哮喘情况。但是,国内使用盏嫉小鼠变应性炎症模型较少。本研究使用目自,际醣冉铣墒斓穆亚宓鞍字旅艉图し/螅菇亚宓鞍字旅簦し⑿∈蠓尾勘涮从π匝字⒌哪P停=疶,珺痗步的实验打下基础。‘瑃甌..瓾—.瑃琫甌一獃甒.,,
材料与方法一、实验动物/∈螅—芰洌菩购白复旦大学附属中山医院动物实验中心三、主要实验仪器ㄊ降臀赂咚倮胄幕普通照相显微镜日本公司雾化吸入器细胞计数板四、主要试剂配制旅粲寐亚宓鞍着渲主要成分是卵清蛋白洞慷%,粉末状,取尤雔的生理盐水中,充分溶解后,取出加入生理盐水中,混匀,取等体积的免疫佐剂:,混合,放置分钟。し⒂寐亚宓鞍着渲成溶液。五、动物分组随机分为『6哉兆楹拖椋孔楦弧六、实验步骤和方法旅艉图しⅲ分别于第旄骨蛔⑸.旅粢海诘欤小鼠放置于一个密闭容器中訧%芤簂砘入分钟,每天一次,连续激发三天。最后一次雾化吸入后小时处死小鼠。致敏及激发步骤同致敏/激发组,每次注射相同体积的生理盐水凝⊙:椭芊闻莨嘞矗%戊巴比妥腹腔注射麻醉后,气管切丌,插管,生理盐水/次,灌洗巍>蒸蘅粽Q矍虿裳#稳敫嗡乜鼓苣冢离心血浆移至另一干净管中,一。4妗芊闻莨嘞匆赴苁头掷嗉剖二、主要试剂卵清蛋白德国辽宁医疗设备厂上海医疗设备厂主要成分是卵清蛋白,取芙庥趌生理盐水中配制胶,雾化吸入生理盐水。复旦人学上海医学院临床医学八年制毕业论文
胄种樱占纳锨逡阂浦亮硪磺褰嗟腅苤校℃保存,细胞沉淀用硌嗡匦糜谙赴苁剖出每毫升的细胞数。其余细胞沉淀再次离心后弃去上清液,用生理盐水重悬后涂片,晾干后瑞氏染色。光学显微镜进行细胞分类,计数鱿胞,计算嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞和巨噬细胞各占的百分比。巫橹±砑觳椋取小鼠肺组织放入ゼ兹┕潭ㄒ褐泄潭ü埂39嫒〔暮螅刑荻纫醇脱水,组织透明处理,浸蜡,石蜡包埋切片,染色,光镜下观察肺组织炎性细胞浸涧,水肿和气道上皮损伤情况,根据谋曜冀衅分,标准如下:=癇邢赴蜃