文档介绍：福林-酚法测定蛋白质含量
目的要求
1．掌握福林-酚法测定蛋白质含量的原理及操作步骤。
2．进一步熟悉使用分光光度计的操作。
实验原理
在碱性条件下，蛋白质与铜作用生成蛋白质-铜复合物。该复合物随后将磷钼酸-磷钨酸还原，发生显色反应，产生蓝色（钨兰+钼兰）。蓝色的强度在蛋白质浓度为25~250μg/mL之间时与蛋白质的含量成正比。
根据多组标准蛋白质溶液与福林-酚试剂反应后所测得的吸光度，绘制标准曲线。以此便可求出未知蛋白质溶液中的蛋白质含量。
仪器与试剂
仪器
分光光度计、试管与试管架、吸量管与洗耳球等
试剂
试剂甲：A 液——10 g Na2CO3，2 g g 酒石酸钾钠溶于500mL蒸馏水中。
B液—— g CuSO4·5H2O 溶于100mL 蒸馏水中。
试剂甲即为将两溶液以A：B=50:1的比例混合后所得的混合溶液。
试剂乙： g 钨酸钠（Na2WO4·2H2O），25 g钼酸钠（Na2MoO4·2H2O）及700mL蒸馏水，再加入50mL 85%磷酸，100mL浓盐酸，充分混合，接上回流冷凝管以小火回流约10小时。回流结束后加入150 g硫酸锂，50mL蒸馏水及数滴液体溴，开口继续沸腾15分钟一边驱除过量的溴，冷却后溶液呈黄色。注意此时溶液的黄色为亮金黄色，如仍有绿色显现，须再重复滴加液体溴的步骤。将所得溶液稀释至1000mL，过滤后将滤液保存在棕色试剂瓶中。
使用时用标准氢氧化钠溶液滴定，以酚酞为指示剂，然后适当稀释（约加1倍水），使最终的酸浓度为1 mol/L。
标准蛋白质溶液：取结晶BSA溶于蒸馏水，浓度为250 μg/mL。
未知蛋白质溶液：浓度未知的牛血清酪蛋白溶液，使用时不需要稀释。
实验步骤
将试管标号并按下列顺序加入各试剂
试管
1
2
3
4
5
6
7
8
9
蛋白质含量/μg
—
25
50
100
150
200
250
—
—
BSA标准溶液/mL
—

—
—
待测蛋白质溶液/mL
—
—
—
—
—
—
—

蒸馏水/mL