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作者签名:查壑学位论文作者签名:碜嚣浑≥二△。盈中科院上海生命科学研究院研究生学位论文声明研究生学位论文版权使用授权声明不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重日期:M啬昕贘,月竹日手段保存和汇编本学位论文。保密的论文在解密后遵守此规定。兰塑迹』本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容或属合作研究共同完成的工作外,本论文要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。所呈交的学位论文,实验结果均由相应的实验数据分析得出,实验数据真实可靠。该声明的法律结果由本人承担。本人完全了解并同意遵守中科院上海生命科学研究院有关保留、使用学位论文的规定,郎:生科院有权保留送交论文的复印件和电子文件,并提供论文的目录检索及借阅、查阅;生科院可以公布论文的全部或部分内容,可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或其它复制导师签名:日期:厂
致谢提供最好的科研环境,感谢技术支持和行政部门为科研提供了最为有力的后勤保抗体表达纯化,乖蹲紼的建立和动物实验,王永进博士为单抗实淌谔峁┝薐的最后感谢我的父母,我的姐姐和我的妻子对我所从事的事业的理解,支持和本项研究是在教授的指导下完成的,得到了上海巴斯德健康研究基金会的资助。衷心感谢教授和教授,没有他们的大力支持,悉心指导和无私帮助,我不可能完成这项研究。感谢上海巴斯德健康研究基金会对该项研究的支持。感谢孙兵所长,蓝柯,姜卫红副所长,为所里的发展殚精竭虑,尽力为我们障。感谢上海巴斯德研究所的同仁,在该项研究中,丰田哲也教授为蛋白表达的纯化提供了关键的培训和建议。,陆鹏和孙古亚参与了蛋自表达,验提供建议和帮助。周保罗教授为研究提供了细胞和抗体。在学习和研究中郑逸梅协助完成了许多工作。感谢他们的无私帮助和大力支持。感谢蓝柯和黄忠教授,他们为论文的撰写和课题的完成提供了宝贵的意见和建议。感谢钟劲教授,冷启彬教授,戚中田教授,张欣欣教授,谢幼华教授对论文的指导和评阅。感谢北京生物制品检验检定所的俞永新院士为研究提供了厄《尽8行中国疾控中心梁国栋教授和越南国立热带病和流行病研究所/胡志明巴斯德研究所的,淌谖1狙芯刻峁┝俅惭贰8行话屠璋偷德研究所,猄博士,淌谖猄赴鞍妆达系统的建立提供培训和建议,┦刻峁┝丝筃的抗体,淌冢琍博士,淌谖N姨峁┝嗽诎退沟研究所培训的机会,,。感谢法国里昂蛋白质生物化学研究所的淌谑笛槭壹觳饬丝固蹇乖缀力。感谢英国利物浦大学的淌诤虰镏觳饬种基因型的《尽8行话拇罄抢ナ坷即笱教授和镏检测了抗体对慕徊娣从Α8行环ü鶶咎峁┝耸笛橹兴褂玫佐剂。感谢柬埔寨巴斯德研究所帮助。李懿泽年
摘要本项研究的目的有两个,其一是建立一个乖蹲降腅用于厄腥单抗,建立了一个乖蹲降腅。该方法的检测浓度下限可达病毒感染的小鼠血清中存在鞍祝ǘ任至叉反应。所以,这个考觳夤ぞ呖梢杂糜诨蛐虸到Ⅳ型乙脑病毒感鼠存活率为%,而鞍撞患幼艏磷榈拇婊盥饰ィ幼艏磷樵蛱嵘%。庖哂盏疾目固逖切椭饕N猭,幼艏撩庖呖梢蕴岣逫日本脑炎病毒壮埔倚湍匝撞《荆⑽募虺艼蔷贸娲úサ闹虏』病毒,在亚洲地区广泛传播。由于很少能从病人的血液或脑脊液中检测或分离到乙脑病毒,检测固迨且倚湍匝壮S玫恼锒戏椒ǎ欢妹鸹畹牟《究帕或减毒的活疫苗免疫人或动物是预防和控制乙型脑炎的有效方法。黄病毒的蛋白是一个分泌的糖蛋白,在病毒的生命周期和致病性方面扮演多种重要角色。的检测;其二是研究非变性多聚体鞍鬃魑Q堑ノ灰呙绲拿庖咴砸约翱庖叻从Φ目共《颈;せ啤我们利用果蝇的细胞系,建立了一个扇苄粤厶錘蛋白的高效表达和纯化系统。高纯度的鞍子美疵庖連痗小鼠,得到个抗蛋白的单克隆抗体。选择其中的两个具有高亲和力、识别不同抗原决定簇的一。利用这一工具对诟髦指腥灸P椭械呐ǘ冉卸糠治觯涸谔逋飧染实验中,可以从上清中检测到最高可达腘蛋白。在体内实验中,,检测到鞍的时间点早于脑炎症状的出现。检测乙脑病人的样品中的⑾盅G逯蠳阳性的比例为,。该乖蹲紼訨高度特异,与同属的其他黄病毒不存在交染的检测。在鞍椎拿庖咴苑矫妫么炕腘蛋白以⒖思亮考踊虿患佐剂,两次免疫疕小鼠。刈榈鞍卓梢栽谛∈筇迥谝⑾赴吞逡免疫反应。攻毒实验显示⒌拿庖叻从梢员;ば∈螅跣远哉兆榈男抗体的效价,而ザ烂庖呖梢砸鹌涿庖咝∈罄丛吹钠⑾赴罅康牟畍。为了进一步研究保护机制,将抗男∈罂寡G遄⑸涞轿疵庖叩男鼠体内,进行攻毒实验,测试被动保护效果,结果显示,抗固蹇梢蕴峁サ谋;ばЧA硗猓秆个抗牡タ共馐员欢;ぃ个抗羧基段片段的单抗显著延长小鼠的存活时间。。
鼠体内引起保护性免疫反应,佐剂可以显著提高保护效果。体外实验显示,蛋