文档介绍：大肠杆菌生长曲线的测定水、环境中微生物的测定
林亲雄阎春兰李晓华
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了解光电比浊计数法的原理。
学****掌握光电比浊计数的操作方法。
通过细菌数量的测量了解大肠杆菌的生物特征和规律，绘制生长曲线。
实验31 大肠杆菌生长曲线的测定
一、实验目的
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生长曲线
将少量纯种单细胞微生物接种到定量的液体培养基中，定时取样测定细胞数量，以培养时间为横坐标，以菌数为纵坐标作图，得到一条反映单细胞微生物在整个培养期间菌数变化规律的曲线。
二、实验原理
一个典型的生长曲线分为延缓期、对数期、稳定期和衰亡期四个时期
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微生物数量的测定方法
稀释平板计数法
显微镜直接计数法
最大概率法
光电比浊法
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稀释平板计数法
对样品稀释培养，据形成的菌落数计数。
优点：活菌计数方法，对设备要求不高。
缺点：操作复杂。
显微镜直接计数法
使用血球计数板在显微镜下直接计数。
优点：操作简便，计数直观。
缺点：计数结果为活细菌和死菌体的总和。
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最大概率法
待测菌液经十倍系列稀释，每稀释度做3-5个重复，经培养后，检查细菌的生长，以有细菌生长的最后三个稀释度的管数作数量指标，由数理统计表查出近似值，再乘以数量指标第一位的稀释倍数，即为原菌液中的菌数。
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最大概率法
例如：某细菌在稀释培养法中生长情况如下：
稀释度： 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7 10-8
重复数： 5 5 5 5 5 5
有菌生长管数： 5 5 5 4 1 0
根据上述结果，数量指标为“541”，查表得近似值为17，乘以第一位数的稀释倍数，得出原始培养物的活菌数=17×105个
优点：活菌计数，适用于特殊细菌。
缺点：计数结果为概值。
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光电比浊法
光电比浊法是利用在一定的范围内，微生物细胞浓度与透光度成反比的原理。当细菌细胞在溶液中数量越多，浊度越大，在光电比色计中测定时所吸收的光线越多。
优点：简便快速，适合于自动控制。
缺点：测定结果受培养液成分影响；某些样品样品不适合用此法。
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菌种
培养不同时段的大肠杆菌。
仪器或其他用具
分光光度计，比色皿等。
三、实验器材
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开电源，仪器预热20 min，将波长调至600 nm处。
打开样品室，将挡光体插入比色皿架，将其推或拉入光路。
盖好样品室盖，在T MODE下，按0%T键调零透射比。
取出挡光体，按100%T/OA键调100%透射比。
四、实验步骤

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