文档介绍：大肠杆菌生长曲线的测定
水、环境中微生物的测定
林亲雄阎春兰李晓华
实验31大肠杆菌生长曲线的测定
实验目的
>了解光电比浊计数法的原理。
学****掌握光电比浊计数的操作方法。
>通过细菌数量的测量了解大肠杆菌的生物
特征和规律,绘制生长曲线。
实验原理
生长曲线
将少量纯种单细胞微生物接种到定量的
液体培养基中,定时取样测定细胞数量,
以培养时间为横坐标,以菌数为纵坐标作
图,得到一条反映单细胞微生物在整个培
养期间菌数变化规律的曲线。
一个典型的生长曲线分为延缓期、对数期
稳定期和衰亡期四个时期
微生物数量的测定方法
稀释平板计数法
显微镜直接计数法
最大概率法
光电比浊法
稀释平板计数法
对样品稀释培养,据形成的菌落数计数。
优点:活菌计数方法,对设备要求不高
缺点:操作复杂
显微镜直接计数法
使用血球计数板在显微镜下直接计数。
优点:操作简便,计数直观。
缺点:计数结果为活细菌和死菌体的总和。
最大概率法
待测菌液经十倍系列稀释,每稀释度做3-5
个重复,经培养后,检査细菌的生长,以有细
菌生长的最后三个稀释度的管数作数量指标,
由数理统计表査出近似值,再乘以数量指标第
位的稀释倍数,即为原菌液中的菌数。
最大概率法
例如:某细菌在稀释培养法中生长情况如下:
稀释度:
10-310±105106107108
重复数
5
5555
有菌生长管数:55
0
根据上述结果,数量指标为“541”,查表得近似值为17,乘
以第一位数的稀释倍数,得出原始培养物的活菌数=17×105个
优点:活菌计数,适用于特殊细菌。
缺点:计数结果为概值
>光电比浊法
光电比浊法是利用在一定的范围内,微生物细
胞浓度与透光度成反比的原理。当细菌细胞在
溶液中数量越多,浊度越大,在光电比色计中
测定时所吸收的光线越多。
优点:简便快速,适合于自动控制。
缺点:测定结果受培养液成分影响;某些样
样品不适合用此法
、实验器材
菌种
培养不同时段的大肠杆菌。
>仪器或其他用具
分光光度计,比色皿等。
四、实验步骤

开电源,仪器预热20min,将波长调至600
nm处上。
打开样品室,将挡光体插入比色皿架,将
其推或拉入光路。
盖好样品室盖,在 T MODE下,按0%键调零
透射比。
>取出挡光体,按100%T/OA键调100%透射比