文档介绍：血清总蛋白和白/球比值测定
一、血清总蛋白的测定（双缩脲法）
二、血清白蛋白的测定（溴甲酚绿法）
1
医学ppt
实验目的：
1、熟悉血清总蛋白的测定方法：双缩脲法
2、掌握血清总蛋白测定的临床意义
3、熟悉血清白蛋白的测定方法：溴甲酚绿法
4、掌握血清白蛋白测定和白蛋白与球蛋白的含量比（A/G）测定的临床意义
2
医学ppt
一、血清总蛋白的测定
实验原理：
1、双缩脲反应：两个尿素分子缩合生成双缩脲（H2N—OC—NH—CO—NH2)，在碱性溶液中与铜离子作用，生成稳定的紫红色配合物，即双缩脲反应。CuSO4的碱性溶液称双缩脲试剂。
双缩脲+铜离子 紫红色
2、蛋白质的定量测定：蛋白质与双缩脲相似，分子中的肽键能与双缩脲试剂形成紫色配合物。这种紫色配合物在540nm处有明显吸收峰。吸光度在一定范围内与蛋白质含量成正比，常用于蛋白质的定量测定。
碱性溶液
3
医学ppt
生理盐水
双缩脲试剂
蛋白质标准液
待测血清稀释液
实验试剂：
生理盐水：。
双缩脲试剂：， ，完全溶解后，加入24%氢氧化钠100ml，用蒸馏水稀释到1L，置于聚氯 乙烯瓶内盖紧保存。
蛋白质标准溶液：收集混合血清，经凯氏定 氮法定值，用作蛋白质标准液。储存于冰箱中备用。也可用10mg/mL牛血清白蛋白替代。
待测血清用生理盐水按1:10稀释。
4
医学ppt
实验步骤：
混匀，37度水浴放置10min，以空白管调零点，在540nm波长处进行比色，分别读取各管的吸光度。
计算:血清总蛋白含量= —— *蛋白质标准液浓度*稀释倍数（g/L）
测定管
标准管
空白管
血清/mL
—
—
蛋白质标准液/mL
—
—
生理盐水/mL
—
—
双缩脲试剂/mL
取3支试管，按下表操作。
A测定
A标准
5
医学ppt
临床意义：
1、血清总蛋白浓度增高
（1）血液浓缩，导致总蛋白浓度相对增高：严重腹泻、呕吐、高烧时急剧失水、休克、慢性肾上腺皮质功减退，血清总蛋白浓度可明显升高。
（2）血浆蛋白质合成增加：主要见于球蛋白合成增加，如多发性骨髓瘤患者，其蛋白含量可超过50g/L。
6
医学ppt
2、血清总蛋白浓度降低
（1）血液稀释，导致总蛋白浓度相对降低：如静脉注射过多低渗溶液或因各种原因引起的钠、水潴留。
（2）摄入不足和消耗增加：食物中长期缺乏蛋白质，慢性胃肠道疾病引起的消化吸收不良，患消耗性疾病等，均可造成血清蛋白浓度降低。
（3）合成障碍：主要见于肝脏患疾。血浆清蛋白及大部分球蛋白均由肝脏合成，肝功能严重损害时，血浆蛋白质的合成量减少，其中以清蛋白浓度降低最为明显。
（4）蛋白质丢失：严重烧伤时大量血浆渗出，大量失血。
7
医学ppt
1、双缩脲试剂中酒石酸钾钠的作用是配合铜离子，以维持铜离子在碱性溶液中的溶解性；碘化钾是抗氧化剂，防止碱性酒石酸自动还原。
2、由于各种血清蛋白质的相对分子质量不同，古其浓度不宜用mol/L表示，而用g/L表示。
3、高脂、黄疸及溶血标本应做血清空白对照来校正误差。
4、本法绘制的标准曲线是一条通过原点的直线，在浓度小于100g/L时呈良好的线性关系。
注意事项：
8
医学ppt
二、血清白蛋白的测定
实验原理：
1、溴甲酚绿法：在不分离血清中白蛋白的情况下直接测定白蛋白的一种方法。白蛋白具有与阴离子染料结合的性质，在pH=，带正电荷的白蛋白（pI=）与阴离子染料溴甲酚绿结合，由黄色变为蓝绿色。
白蛋白+溴甲酚绿 蓝绿色复合物
2、白蛋白含量的测定：蓝绿色的深浅与白蛋白的浓度成正比，因此可直接测定血清白蛋白的含量。
pH=
9
医学ppt
溴甲酚绿储存液：BCG 419mg溶于10ml NaOH，加NaN3 100mg，定容至1L，储存于棕色瓶中备用。
（pH=）：分别配制 ，按体积比 : 混合。每1L混合液加入NaN3 100mg。
30%聚氧化乙烯月桂醚溶液：取Brij-35 30g，加少量水，60度水浴溶解加水至100ml。
BCG应用液：BCG储存液 250ml、(pH=)