文档介绍：模型制作论文数学模型论文脊髓继发性损伤的动物模型制作【摘要】目的急性脊髓损伤后大鼠脊髓横断面神经原的变化。方法用组织化学和图象分析方法观察大鼠脊髓细胞的变化。结果大鼠脊髓神经原细胞免疫反应发生变化(P<) 。结论尼氏染色及电镜观察说明继发性脊髓损伤大鼠模型制备成功。【关键词】继性损伤;脊髓;大鼠急性脊髓损伤后开始时常为不完全性,最后结果常为两种损害机制引起: 原发性脊髓损伤和继发性脊髓损伤(SSCI) 。脊髓组织遭受机械外力损伤后瞬间引起的组织损害称为原发性损伤,原发性损伤包括机械压迫、出血、电解质从受损细胞中外溢等是在受伤时由外力产生的决定性的、不可逆的损伤,无法针对其损伤机制进行有效的治疗。继发性脊髓损伤为伤后几小时至几天发生的一系列损伤激活的自身破坏过程,使最初病灶周围原来完整的组织发生自身破坏性病变,周围神经功能损害逐渐发展。所产生的脊髓损害远远超过了原发性损伤[ 1 ]。 1 资料与方法实验材料雄性 Wistar 大鼠中国医科大学动物室提供。实验动物分组本实验选用雄性健康 Wistar 大鼠 40只, 体重 260~300 g ,随机分成二组。正常对照组: 20 只。实验组: 20 只。实验方法继发性脊髓损伤大鼠模型制备 1% 戊巴比妥钠腹腔麻醉动物(30 mg/kg) ,俯卧位固定于立体定位仪上。以 T 10 为中心暴露上下位锥板,咬除锥板,保持硬脊膜完整。在 T 10 阶段节段脊髓表面垫一曲度与脊髓表面一致的3 mm×8 mm 塑料片,用 30g 重物垂直压迫 T 10 节段脊髓 10 min ,逐层缝合肌肉皮肤。符合以下条件的大鼠归入损伤组:压迫时身体痉挛性颤动、尾巴痉挛性摆动、双下肢及躯体回缩样扑动;压迫后硬脊膜内充血或水肿,双下肢呈迟缓性瘫痪,斜板实验测定最大角度小于 30 度。对照组大鼠只暴露脊髓。术后不同时间点处死动物,4 %多聚甲醛灌注固定, 无菌条件下取损伤节段脊髓组织约 cm ,液氮保存或石蜡包埋。观察期间大鼠如有死亡即时补足。组化标本制备对实验动物用 1 %戊巴比妥钠(40 ml/kg) 腹腔麻醉后开胸,经左心室 70滴/min 滴入 1 %肝素钠的生理盐水 500 ml ,同时剪开右心耳。继用磷酸盐缓冲液(PBS,pH=) 配制的固定液(含4 %多聚甲醛) 灌流固定。取出实验动物的脊髓组织,放入含 4 %多聚甲醛 PBS 的固定液中进行后固定大约 2h, 之后将实验动物的脊髓组织切成薄片移入含 20 %蔗糖的 PBS 中。在4℃冰箱中存放, 至组织薄片沉底, 经水包埋, 恒冷箱连续横切片, 片厚 20μm。经 OCT 包埋,恒冷箱连续切片,片厚 16μm, 70℃保存备用。尼氏染色冰冻切片吹干,经 PBS 漂洗 5 min ×3 次,将切片置入 1% 甲苯***蓝溶液中 37℃孵育 90 min , 取出后用蒸馏水冲洗, PBS 漂洗 5 min ×3次, 梯度酒精脱水, 二甲苯透明,中性树胶封片,光镜下观察。透射电镜技术各组动物在 1% 戊巴比妥钠(40 mg/kg 体重) 腹腔麻醉下,用含 1% 肝素钠生理盐水 200 ml 快速冲洗后,用 2% 多聚甲醛及 % 戊二醛的磷酸缓冲液