文档介绍：→实验目的
染色原理
染色方法
实验材料
实验内容与步粟
注意事项
实验结寻
、实验目的
,染色原理和染色的
基本操作技术,从而掌握微生物的一般染
色法和革兰氏染色法。
(油镜)的使用方法和无
菌操作技术。
二、樂色原理
由于微生物细胞含有大量水分,对光线的吸收和反射与水
溶液的差别不大,机体是无色透明的,与周围背景没有明显的
反差,在普通光学显微镜下不易识别,必须对它们进行染色
使绎染色后的菌体与背景形成明显的色差,从而能更清楚地观
察到其形态和结构。
微生物细胞是由蛋白质、核酸等***电解质及其他化合物
组成。所以,微生物细胞表现出***电解质的性质。***电解
质兼有碱性基和酸性基,在酸性溶液中离解岀碱性基呈碱性带
正电。在碱性溶液中离解出酸性基呈酸性带负电。
经测定,细菌等电点pH在2-5之间,故在中性、碱性或偏
酸性溶液中,细菌的等电点均低于上述溶液的pH值,所以细
菌带负电荷,容易与带正电荷的碱性染料结合,故用碱性染料
染色的较多。微生物体内各结构与染料结合力不同,故可用各
种染料分别染微生物的各结构以便观察。
三、染色方法
(-)简单染色法
简单染色法又叫作普通染色法,只用一
种染料使细菌染上颜色,如果仅为了在显微
镜下看清细菌的形态,用简单染色即可
二)复染色法
用两种或多种染料染细菌,目的是为了鉴别不同性
质的细菌,所以又叫鉴别染色法。主要的复染色法有革
兰氏染色法和抗酸性染色法。
革兰氏染色法:不仅能观察到细菌的形态,而且还
可将所有细菌区分为两大类:染色反应呈蓝紫色的称为
革兰氏阳性细菌,用表示;染色反应呈红色(复染
颜色)的称为革兰氏阴性细菌,用G表示。细菌对革兰
氏染色的不同反应,是由于它们细
不同而造成的
、实验材料
、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸
接种环、载玻片、酒精灯等。
、草酸铵结晶紫染液、碘液
95%乙醇、番红(沙黄)染液
:表皮球菌、变形杆菌
五、实验内容与步隳
()细菌的简单染色步骤
涂片→干燥→固定→染色→水洗→干燥→镜检
取干净的载玻片于实验台上,在载玻片的中央滴一滴无菌
蒸馏水,将接种环在火焰上烧红,待冷却后从斜面挑取少量菌
种(表皮球菌或变形杆菌)与玻片上的水滴混匀后,在载玻片上
涂布成一均匀的薄层,涂布面不宜过大。
涂片最好在室温下使其自然干燥,有时为了使之干得更快
些,可将标本面向上,手持载玻片一端的两侧,小心地在酒精
灯上高处微微加热,使水分蒸发,但切勿紧靠火焰或加热时间
过长,以防标本烤枯而变形。
定常常利用高温,手持载玻片的一端,标本向上
在酒精灯火焰外层尽快的来回通过2~3次,共约2~3秒钟
并不时以载玻片背面加热触及皮肤,不觉过烫为宜(不超
过60℃),放置待冷后,进行染色。
在涂片薄膜上滴加染色液(石炭酸复红、草酸铵结晶紫
或美蓝任选一种)一滴,使染色液覆盖涂片,染色约lmin。
斜置载玻片,在自来水龙头下用小股水流冲洗,直至
洗下的水呈无色为止。
用吸水纸吸去涂片边缘的水珠,置于室温下自然干燥。
用吸水纸时切勿将菌体擦掉
用显微镜观察,并用铅笔绘出细菌形态图。
(二)细菌的革兰氏染色步骤
凃片→干燥→固定→初染→水洗→媒染→水洗→脱色→
水洗→复染→水洗→干燥→观察
(均以无菌操作)分别在同一张载玻
片上做涂片、干燥、固定,方法均与简单染色的相同。
。
,滴加95%乙醇脱色,至流岀的乙醇不现紫色
为止,大约需时20~30s,随即水洗。
,水洗。
,待标本片干后置显微镜下,用
低倍镜观察,发现目的物后用油镜观察,注意细菌细胞
的颜色。绘出细菌的形态图并说明革兰氏染色的结果。