文档介绍：实验一细菌的染色
球菌
staphylococci
taphylocpc
弧
实验二细菌的简单染色和革兰氏染色
实验目的
■
口2理解革兰氏染色机理,并掌握其操作术
,掌握芽孢柒色的方法
实验原理-简单染色
细菌的细胞小而透明,在普通的光学显微镜下不易识别
必须对它们进行染色。利用单一染料对细菌进行染色,使
经染色后的菌体与背景形成明显的色差,从而能更清楚地
观察到其形态和结构。此法操作简便,适用于菌体一般
状和细菌排列的观察。
常用碱性染料进行简单染色,这是因为在中性、减性或弱
酸性溶液中,细菌细胞通常带负电荷,而诚理染料在电离
时,其分子的染色部分带正电荷,因此碱性染料的染色部
分很容易与细菌结合使细菌着色
后的细菌细胞
背景形成鲜明的对比,在显微镜下更易于识别常用作简
单染色的
美蓝、结晶紫、碱性复红
糖类产酸使培养基下降时,细菌所带正电荷增加,此时
可用伊红、酸性复红或刚果红等酸性染料染色
实验原理-简单染色
染色前必须固定细菌。其目的有二:一是杀
死细菌并使菌体粘附于玻片上;二是增加其
对柒料的亲和力。常用的有加热和化学固定
两种方法。固定时尽量维持细胞原有的形
实验原理-革兰氏染色
革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家
Christaingram氏创立的,革兰氏染色法可
将所有的细菌区分为草兰因阳性菌G)和
革兰氏阴性菌(G)两大类。革兰氏染色法
是细菌学中最重要的鉴别染色法
口革兰氏杂色法所以能将细菌分为革兰氏阻性
和革兰氏阴性,是由这两类细菌细胞壁的
构和组成不同决定的。
附:部分细菌的革兰氏染色谱
微生物
染色反应
革兰氏阳性(G+)
革兰氏阴性(G)
葡萄球菌
脑膜炎双球菌
球菌
链球菌
肺炎球菌
淋病双球菌
四联球菌
卡他球菌
大肠杆菌
沙门氏杆菌
痢疾杆菌
白喉杆菌
变形杆菌
杆菌
耐酸性杆菌
绿脓杆菌
芽孢杆菌
嗜血性杆菌
梭状芽孢杆菌
布鲁氏杆菌
巴氏杆菌
马鼻疽杆菌
克雷伯氏菌
其他
放线菌
弧菌
真菌
螺旋体
实验原理-革兰氏染色
革兰氏染色法的基本步骤是:先用初染剂结
晶紫进行初染,再用碘液媒染,然后用乙醇
或内脱色,最后用复染剂如番红复染。
经此方法柒色后,细胞保留初染剂蓝色的
细菌为革兰氏阻性菌;如果细胞中初樂剂
脱色剂洗脱而使细菌染上复染剂的颜色(红
色),该菌属于革兰氏阴性菌。
革兰氏染色机理
当用结晶紫初染后,像简单染色法一样,所有细菌
都被染成初染剂的蓝紫色。碘作为媒染剂,它能与
结晶紫结合成结晶紫
从而增强了染
料与细菌的结合力。当用脱色剂处理时,
氏阳性细菌的细胞壁主
要由肽聚糖形成的网状结构组成,壁厚、类脂质
量低,用乙醇(或两***)脱色时细胞壁
聚
糖层的网状结构孔径缩小,透性
晶紫碘的复合物不易被洗脱面保留在细
脱色和复杂后仍保留初染剂的蓝紫色。革兰氏阴
菌则不同,由于其细胞壁肽聚糖层较薄、类脂含量
高,所以当脱色处理时,类脂质被乙醇***
解,细胞壁透性增大,使结
容易被洗脱出来,用复染剂复柒后,细胞被染上复
刂的红色