文档介绍：华中农业大学
博士学位论文
猪繁殖与呼吸综合征病毒的感染性克隆及其复制子载体的研究
姓名:黄勤锋
申请学位级别:博士
专业:预防兽医学
指导教师:陈焕春
20090601
摘要猪繁殖与呼吸综合征碨怯芍矸敝秤牒粑酆险鞑《讯鸬矸敝秤牒粑酆险鞑《株全基因组克隆、序列测定及遗已成为危害养猪业最严重的传染病之一。我国于年首次从国内猪群中分离到佣な盗吮静≡谖夜拇嬖谟肓餍校鹤月份以来,在我国南方的湖北、湖南、江西、安徽等省份相继暴发高致病性猪蓝耳病,至少嗤蛲分矸及其复制子载体的研究。主要研究内容和结果如下:株全基因序列,我们分四段设计引物,通过扩增了和,测序结果经分析正确后,利用砑个片段拼接成完遗传进化树分析表明,我国流行的毒株可以分为鲅侨海阂訡4淼陌括,等高致病性变异毒株在内的属于亚群灰訴4淼陌量国内分离毒株属于亚群6狙芯康腃株属于美洲型,在系统发生树上隒、虰株位于同一小分支,与美洲型参考株株同时利用砑關全序列同源性分析后,,确定了重组区域为,证实了重组在唐鹱欧浅V匾5淖饔谩猪繁殖与呼吸综合征病毒旮腥拘钥寺〉墓菇本研究使用高保真酆厦附谢蚶┰觯扛銎蔚难粜钥寺∷个进行一种以妊娠母猪严重繁殖障碍以及仔猪的呼吸道症状和高死亡率为特征的传染病。自年首次报道发现于美国以来,现已遍及世界各主要养猪国家与地区,并病,多万头猪死亡,给我国的养猪业造成了极为严重的经济损失,引起了社会的广泛关注。而正链《镜姆聪蛞糯ú僮飨低吃诓《靖粗啤⒅虏』蒲芯浚共毒药物筛选和新型疫苗、导向载体制备等方面是一个极其有用的工具。基于此,本研究开展了甑娜ɑ蜃榭寺∮氩庑颉⒁糯ń治觥⒏腥拘钥寺传进化分析以猪繁殖与呼吸综合征病毒株为材料,参考耆ɑ蜃椋玫腸寺≈:覆盖全基因组重叠片段、虳大小依次为、、整基因组序列,获得全基因组核苷酸序列为不含;该序列已经递交给蛄械锹己盼#篎属于亚群软件对可能产生重组的序列进行相似性分析和分析;结果显示,我国的猪繁殖与呼吸综合征病毒的感染性克隆及其复制子载体的研究
测序,并将测序结果同惺章嫉男蛄薪斜冉希】赡艿丶跎貾三入的突变,获得了较为可靠的基因组序列。将龌蚱蜛、、来慰寺蠓直鹨牒嗣窰序列和罩剐蛄校钪栈竦酶枚局甑娜ǔ寺瓹。将质粒瓹用质脂体转染赴H竞∈,传至第三代出现明显的细胞病变,经扩增笮『筒庑蛲て谙喾な祷竦昧擞懈腥拘缘幕指床《荆砻鞒晒的构建出了具有感染性的ǔ寺 NR院笤赾缴涎芯縋的病毒复制、致病机制研究,抗病毒药物筛选和新型疫苗、导向载体制备等方面提矸敝秤牒粑酆险鞑《复制子载体的研究为构建含有报告基因的猪繁殖与呼吸综合征病毒亚基因组复制子系统,我们首先在构建感染性克隆策略的基础上,,在结构基因中保留与猪繁殖与呼吸综合征病毒复制想姆椒ㄒ氡ǜ婊駿硗猓窆菇ǜ腥拘钥寺∫谎诟粗谱’端引入后按感染性克隆构建策略依次把各个片段克隆到低拷贝质粒校钪栈竦煤体转染赴ü鄄霦ü狻⒘魇椒治龊蚏榷ㄐ允匝榈确椒,,复制子的成功构建为其进一步发展成疫苗载体、为研究病毒复制、致病机制研究及抗病毒药物筛选奠为了进一步探讨粗谱幼魑R呙缭靥宓目赡苄裕孕∈笪DP投铮复制子载体圆煌亮和庖咝∈螅匝榻峁明,无论体液免疫还是细胞免疫,复制子载体都能较高的体液免疫水平和细胞免疫水平,具有较好的免疫效果。同时复制子也能够激发对鞍椎奶逡好庖撸砻粗谱釉靥蹇梢宰魑P滦偷亩嗷虮泶锏暮蜓∫呙缭靥濉关键词:猪繁殖与呼吸综合征病毒;感染性克隆;复制子;表达载体:籈到低拷贝质粒校痹谌ɑ蜃’端引入舳有蛄校’端供技术平台。关的鞍仔蛄小⑸嫌魏琓男蛄屑跋掠蔚’端非编码顺式激活序列,同时利用舳有蛄校’端蠓直鹨牒嗣窰序列和罩剐蛄校报告基因的复制子系统质粒瓹.=。结果显示,,.%的细胞发出荧光,结果表明,复制子在赴心芄徽1泶锖妥晕腋粗啤1狙芯克航ǖ暮斜ǜ婊虻定了基础。免疫华中农业大学博士学位论文
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缩略语表华中农业大学博士学位论文
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