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《基因工程制药》PPT课件 (2).ppt

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《基因工程制药》PPT课件 (2).ppt

上传人:相惜 2020/12/10 文件大小:713 KB

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《基因工程制药》PPT课件 (2).ppt

文档介绍

文档介绍:第二章 基因工程制药
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医学PPT
基因工程是将一种生物的基因分离出来,在体外进行酶切和连接插入载体构成遗传物质的新组合,导入另一种宿主细胞使目的基团得到复制和表达的技术。

基因工程可生产的主要药物是指医用活性蛋白和多肽,包括免疫性蛋白、细胞因子、激素、酶等。
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医学PPT
基因工程药物生产的过程
目的基因的获得
基因的表达
基因工程菌生长代谢的特点
基因工程菌的稳定性
基因工程菌的发酵
基因工程药物的分离纯化
包含体的复性
基因工程药物的质量控制
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医学PPT
基因工程药物生产的过程
获得目的基因
重组质粒构建
基因工程菌
除菌过滤
产物分离纯化
培养工程菌
包装
成品检定
半成品检定
基因工程的基本要素:工具酶、目的基因、载体、宿主
上、下游
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目的基因的获得
一、构建基因文库
提取细胞基因组DNA
酶切
克隆至特定载体
杂交或其他方式筛选
基因文库
转化特定宿主细胞
探针(如根据氨基酸序列反推过来的DNA序列,根据蛋白保守性得到的同源序列,已知的部分DNA序列 )
获取目的基因
适合于无内含子的原核生物
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二、构建cDNA文库
适合于真核生物基因克隆。
提取细胞mRNA
反转录合成cDNA第一链
cDNA第二链的合成
杂交筛选或其他方式筛选
cDNA文库
转化特定宿主细胞
探针
获取目的基因
cDNA片断与载体连接
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三、 PCR方式
先决条件:已知目的基因的DNA序列。
原核:以基因组为模板
反转录PCR(RT-PCR):提取mRNA,反转录生成cDNA作为模板进行PCR扩增获得目的基因。
四、化学合成
已知基因或蛋白质全长序列,合成短的寡核苷酸片断,拼接为长的DNA片断,再用连接酶连接成完整基因。
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基因表达
基因表达:结构基因在生物体中的转录、翻译及所有的加工过程。
一、宿主细胞的选择
首要条件:能够生产出有活性的目的产物。
其他条件:容易获得较高浓度的细胞;
产物的产量、产率高;
能利用易得廉价原料;
不致病、不产生内毒素;
容易进行DNA重组技术操作;
产物容易提取纯化。
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表达系统的分类:
1、原核表达体系
(1)大肠杆菌:目前采用最多的原核表达体系。
革兰氏阴性菌
优势: 遗传背景清楚,基因组序列已确定;
生长迅速,平均20~30min繁殖一代;
易于培养,生产成本低,适合大规模培养;
外源基因表达水平高,可达总蛋白的5~30%以上;
有大量可供选择利用的克隆和高效表达载体。
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