文档介绍：分子克隆常用的DNA聚合酶
分子克隆常用的DNA聚合酶分子克隆常用的DNA聚合酶主要内容（一）.基本概念
（二）.分子克隆技术的基本过程

主要内容
（一）.基本概念
（二）.分子克隆技术的基本过程

（一）.基本概念:
1. 分子克隆：是在体外对DNA分子按照既定的目的和方案进行人工重组，将重组分子导入到合适的受体细胞中，使其在细胞中扩增和繁殖，以获得DNA分子大量复制，并使受体细胞获得新得遗传特征的过程。
2. Dalton，bp，nt
道尔顿（Dalton，Dal，Da，D）：分子量的单位，蛋白质是大分子，所以常用kDa（千道尔顿）来表示。
碱基对（ bp）＝ base pair，1 kb就是1000个碱基对；
nt＝核苷酸 nucleotide 。
（一）.基本概念

在分子克隆实验中，有时我们会在待扩增的目的基因片段两端加上特定的酶切位点，用于后续的酶切和连接反应。由于直接暴露在末端的酶切位点不容易直接被限制性内切酶切开，因此在设计PCR引物时，人为的在酶切位点序列的5‘端外侧添加额外的碱基序列，即保护碱基，用来提高将来酶切时的活性。
（一）基本概念
-A克隆：
利用Taq酶在PCR产物3‘末端有加上一个A的特性，使得Taq酶的PCR产物或经过Taq酶加A的PCR产物，和一个人工加上一个3’末端具有1个T的载体进行连接，由于突出末端可以互补，这样可以大大提高目的基因和载体的连接效率。
（一）基本概念
：
降解杂合在DNA链上的RNA的磷酸二酯键。可消化mRNA。
：
是指能在连接酶作用下和外源DN***段或基因连接，并运送DNA分子进入受体细胞的DNA分子。
（一）基本概念
(plasmid)
细菌染色体外的遗传物质，为环形闭合的双股DNA，存在于细胞质中，质粒编码非细菌生命所必须的某些生物学性状，如性菌毛、细菌素、***和耐药性等。质粒具有可自主复制、传给子代、也可丢失及在细菌之间转移等特性，与细菌的遗传变异有关。
（一）基本概念

又称致育因子或性因子。，约等于2%核染色体DNA的小型共价闭合环状DNA （cccDNA通过共价键结合形成的封闭环状DNA分子。）。×107 Da，。其中有1/3的基因（tra区）与接合作用有关。
（二）分子克隆的基本过程

（1）.分：得到目的基因
（2）.切：将目的基因和载体用适当的限制性内切酶切割。
（3）.接：将目的基因和载体连接，形成重组子。
（4）.转：将重组子转到适当的宿主细胞中。
（5）.筛：筛选出含有正确重组子的宿主细胞，扩增。
（二）分子克隆的基本过程

分子克隆中对DNA、RNA分子的操作常涉及到一系列酶促反应，这些酶是进行基因克隆时必备的基本工具。