文档介绍：第二章 基因工程中常见工具酶
限制性内切酶—关键用于DNA分子特异切割
DNA***化酶—用于DNA分子***化
核酸连接酶—用于DNA和RNA连接
核酸聚合酶—用于DNA和RNA合成
核酸酶—用于DNA和RNA非特异性切割
核酸末端修饰酶—用于DNA和RNA末端修饰
其它酶类--用于生物细胞破壁、转化、核酸纯化、检测等。
§2-1 核酸内切限制酶
定义：核酸内切限制酶是一类能够识别双链DNA分子中某种特定核苷酸序列，并由此切割DNA双链结构核酸内切酶。
到现在为止已经从很多个不一样微生物中分离出了2300种以上不一样核酸内切限制酶。
核酸内切限制酶发觉及其生物功效（图）
一 、限制修饰系统种类（图）
二、 限制性内切酶定义、命名
1. 定义：广义指上述三个系统中限制酶； 狭义指II型限制酶。
2. 命名：限制酶由三部分组成，即菌种名、菌系编号、分离次序。
比如：HindⅢ 前三个字母来自于菌种名称H. influenzae，“ｄ”表示菌系为ｄ型血清型；
“Ⅲ”表示分离到第三个限制酶。
EcoRI—Escherichia coli RI
HindⅢ—Haemophilus influensae d Ⅲ
SacI (II)—Streptomyces achromagenes I (Ⅱ)
三、Ⅰ型和Ⅲ型核酸内切限制酶缺点
a.Ⅰ型核酸内切限制酶即使能够识别DNA分子中特定序列，但它们切割作用却是随机，在距特异性位点最少1000bp地方能够随机地切割DNA分子，所以这类酶在基因克隆中显然是没有用处。——远距离随机切割
b. Ⅲ型核酸内切限制酶大约从距离识别序列25bp处切割DNA分子。——远距离定点切割
c.Ⅰ型核酸内切限制酶和Ⅲ型核酸内切限制酶，在切割反应过程中，全部会沿着DNA分子移动，所以是一个需要能量过程。——需要能量反应
d.Ⅰ型和Ⅲ型核酸内切限制酶，通常全部是大型多亚基复合物，既含有内切酶活性，又含有***化酶活性。——内切酶活性和***化酶活性
四、Ⅱ型核酸内切限制酶特点
(1)基础特点：
① 在双链DNA分子上有一个特殊靶子序列，即所谓识别序列，并由此切割DNA分子形成链断裂；——识别序列
② 2个单链断裂部位在DNA分子上分布，通常不是相互直接相正确；——单链切割部位
③ 所以，断裂结果形成DN***段，也往往含有互补单链延伸末端
④ 这类型核酸内切限制酶比较简单，不需要能量分子ATP，但需加入Mg++离子，而且是从其识别序列内部切割DNA分子
⑤ 在结构上是一个单一成份，即和Ⅰ型Ⅲ型酶不一样，不含有多个亚基成份；
(2)识别位点又称切割位点、识别序列或靶子序列。绝大多数Ⅱ型核酸内切限制酶全部能够识别由4、5、6或7个核苷酸组成特定核苷酸序列。比如EcoRI识别序列是GAATTC，我们称这么序列为核酸内切限制酶识别序列。呈经典旋转对称型回文结构
(3)平末端和粘性末端
由核酸内切限制酶作用而造成DNA分子断裂作用，通常有下列两种不一样方法：
两条链上断裂位置是处于一个对称结构中心，结果形成——具平末端DN***段。Blunt ends
两条链上断裂位置是交错地、但又是对称地围绕着一个对轴排列，结果形成——具粘性末端DN***段。Cohesive ends
粘性末端概念(定义)：（图）
*是指DNA分子在限制酶作用下形成含有互补碱基单链末端结构，它们能够经过互补碱基间相互作用而重新环化起来。
(4)限制酶识别序列和切割频率
具4个核苷酸组成识别序列限制酶如Sau3A切割频率为44=256
具由6个核苷酸组成识别序列限制酶如BanHI切割频率为46=4096
以上假定条件是，在一条随机排列DNA序列中，假定全部4种核苷酸全部有相同出现频率，那么任何一个4核苷酸或6核苷酸识别靶子全部有上述出现频率。
(5)同裂酶(isoschizomers)
识别一样核苷酸序列部分起源不一样核酸内切限制酶称为同裂酶。比如HpaI
和MspI就是一对同裂酶。同裂酶形成一样末端。有些同裂酶对于切割位点上***化碱基敏感性有所差异，可用来研究DNA***化作用。
(6)同尾酶(isocaudamers)
部分起源不一样、识别靶子序列也各不相同，但却能产生出相同粘性末端，特称为同尾酶。比如BamHI、BglⅡ、Sau3A等即是一组同尾酶。
BamHI GGATCC
BglⅡ AGATCT
Sau3A GATC
*同尾酶在基因克隆中有用处，举例说明：
但产生重组体中原识别位点发生了改变。
(7)识别多核苷酸序列酶
比如HindⅡ就是能