文档介绍：二、基因重组蛋白的分离纯化与分析鉴定(自学）
基因重组蛋白的特点
(1) 目的产物在初始原料中的含量较低;
(2) 含目的产物的初始物料组成复杂,除了目的产物外,还有大量的细胞、代谢、残留培养基、无机盐等，特别是产物类似物对目的产物的分离纯化影响很大；
(3) 目的产物的稳定性差，具有生物活性的物质对 pH、温度、金属离子、有机溶剂、剪切力、表面张力等十分敏感，容易是其失活、变性；
（4）种类繁多，包括大、中、小分子、结构简单或复杂的有机化合物，以及结构复杂又性质各异的生物活性物质；
（5）应用面广，对其质量、纯度要求高，甚至要求无菌、无热源。
分离纯化的基本过程
由于基因工程药物是从转化细胞、而不是从正常细胞生产的，所以对产品的纯度要求也要高于传统产品。
基因工程药物的分离纯化一般不应超过4-5个步骤，包括细胞破碎、固液分离、浓缩与初步纯化、高度纯化直至得到纯品以及成品加工。
发酵液
细胞分离
胞内产物
胞外产物
细胞破碎
固液分离
包含体
细胞碎片分离
变性
复性
浓缩
初步分离
高度纯化
制剂
产品
基因工程药物分离纯化的一般流程
分离纯化技术要求：
(1)技术条件要温和，能保持目的产物的生物活性；
(2)选择性要好，能从复杂的混合物中有效地将目的产物分离出来，达到较高纯化倍数；
(3)收率要高；
(4)两个技术之间要能直接衔接，不需要对物料加以处理或调整，这样可减少工艺步骤；
(5)整个分离纯化过程要快，能够满足高生产率的要求。
（一）基因重组蛋白的主要分离技术

在转子的高速旋转产生的离心力的作用下，利用固体及液体间的密度差来实现分离；
往往是分离的第一个步骤

在制备中，沉淀主要用于浓缩目的，或用于除去留在液相或沉淀在固相中的非必要成分。在生化制备中常用的有以下几种沉淀方法和沉淀剂：
。
、多糖及核酸产品的分离纯化，有时也用于蛋白质沉淀。
、蛋白质及其它两性物质的沉淀。但此法单独应用较少，多与其它方法结合使用。
等电点沉淀法
两性电解质分子上的净电荷为零时溶解度最低，不同的两性电解质具有不同的等电点，以此为基础可进行分离。
如工业上生产胰岛素时，，。
盐析法
定义：在稀盐溶液中，蛋白质的溶解度随盐浓度的增加而升高的这种现象称为盐溶(salting in), 但当盐浓度增加到一定量时，其溶解度又逐渐下降，直到某一浓度时便从溶液中沉出，即为盐析(salting out)
原理：
salting in：蛋白质吸附某种离子→蛋白质彼此排斥，而蛋白质与水相互作用加强→溶解度提高
salting out：大量中性盐加入 →破坏蛋白质分子表面的水活膜，蛋白质表面的电荷被中和→蛋白质相互集聚而析出