文档介绍：液相增加柱效、提高灵敏度的小诀窍
资料收集：
生化 –多肽- 5988-6316EN
升温对于反相 HPLC分离强疏水肽的影响 (B27)
Polypeptide
流动相:
A: %三***乙酸的水
B: %三***乙酸的乙***
2% B / min
进样量: 100µL (50µg的6M脲/5%乙酸)
UV: 210 nm
流速: 1 mL/min
室温
液相色谱柱: ZORBAX StableBond-C18
色谱柱尺寸: x 250 mm 5µm
室温
300C
400C
500C
600C
700C
提高柱温，可增加柱效（提高灵敏度）
环保
样品: 除草剂
流动相: 52/48 M乙酸钠/甲醇, pH 6
流速: mL/min
温度: 40℃, 90℃
检测: UV
除草剂: 柱温的影响
Herbicides: Effect of Column Temperature
1. 西玛津
2. 敌草隆
3. 扑灭津
4. 扑灭净
5. 异丙甲草***
1. Simazine
2. Diuron
3. Propazine
4. Prometryn
5. etolachlor
液相色谱柱: Zorbax StableBond-C18
色谱柱尺寸: x 150 mm, 5μm
40℃
90℃
提高柱温，可增加柱效（提高灵敏度）
生物制药
液相色谱柱: Zorbax 300 StableBond-C3
色谱柱尺寸: x 150 mm, 5μm
肽类/蛋白质: 升温对分离的影响
Peptides/Proteins:
Effect of Elevated Temperature
样品: 多肽
流动相: A = 5: 95, 乙*** : 水, %三***乙酸 (V/V%)
B = 95: 5, 乙*** : 水, %三***乙酸 (V/V%)
梯度: 在 20 min内 15-53%, 后运行时间 12 min
流速: mL/min
温度: 室温 -60℃
检测: UV 215 nm
1. 亮氨酸脑啡呔
2. 血管紧张素II
3. 核糖核酸酶A
4. 牛胰岛素
5. 细胞色素C
6. 溶菌酶
7. 肌红蛋白
8. 碳酸酐酶
Enkephalin
2. Angiotensin II
3. Rnase A
4. Insulin(BOV)
5. Cytochrome C
6. Lysozyme
7. Myoglobin
8. Carbonic anhydrase
提高柱温，
可增加柱效
（提高灵敏度）
生物制药
液相色谱柱: Zorbax StableBond-C8
色谱柱尺寸: 150 mm, 5μm
减小毛细管内径来提高
低浓度样品的检测灵敏度
Reducing Capillary ID to Improve Sensitivity
for Concentration-Limited Samples
流动相: 60%乙***/40%水
流速: 内径 mm-4 uL/min
内径 mm-10 uL/min
内径 mm-50 uL/min
内径 mm- uL/min
温度: 室温
检测器: UV 254 nm
样品: 200 ng联二苯 (100 nl)
减小柱径，可增加柱效（提高灵敏度）
色谱柱技术 – 5988-6454EN
使用小体积色谱柱对于检测器响应时间的重要性 (TE32)
液相色谱柱: ZORBAX StableBond-C18
色谱柱尺寸: x 15 mm µm
流动相:
乙***: 1%甲酸=32: 68
UV: 254 nm
流速: mL / min.
30°C
进样量: 5 µL
响应时间:
响应时间:
响应时间:
响应时间:
响应时间:
-乙酰苯***
acid
缩短检测器响应时间，可增加柱效 （提高灵敏度）
色谱柱技术 ：不同硅胶类型比较 (TE1)
流动相:
%甲醇的二***甲烷
液相色谱柱
toluene
benzani