文档介绍：核酸的提取及鉴定
核酸是遗传信息的载体，是最重要的生物信息分子，是分子生物学研究的主要对象，因此核酸的提取是分子生物学实验技术中最重要、最基本的操作。
一、核酸的分类
DNA (脱氧核糖核酸)
主要存在于细胞核的染色体中。
核外也有少量DNA，如线粒体DNA（mtDNA），叶绿体DNA（cpDNA），质粒DNA。
RNA（核糖核酸）
存在于细胞质中，如mRNA, rRNA, tRNA等。
除上述DNA，RNA外，还有非细胞形式存在的病毒和噬菌体，其或只含DNA，或只含有RNA。
二、DNA提取的几种方法
(一）　非基因组DNA的提取
质粒DNA的提取
碱裂解法
煮沸法
线粒体、叶绿体DNA的提取
差速离心结合SDS裂解法
质粒DNA－碱裂解法
碱裂解法原理
染色体DNA比质粒DNA分子大得多，且染色体DNA为线状分子，而质粒DNA为共价闭合环状分子；
当用碱处理DNA溶液时，线状染色体DNA容易发生变性，共价闭环的质粒DNA在回到中性pH时即恢复其天然构象；
变性染色体DN***段与变性蛋白质和细胞碎片结合形成沉淀，而复性的超螺旋质粒DNA分子则以溶解状态存在液相中，从而可通过离心将两者分开。
质粒DNA－碱裂解法
碱裂解法流程图
对数期菌体
溶液III中和
溶液I充分重悬
溶液II裂解
上清液
抽提
离心洗涤
酒精沉淀
干燥溶解
沉淀
质粒DNA溶液
质粒DNA－煮沸法
煮沸法原理
染色体DNA比质粒DNA分子大得多，且染色体DNA为线状分子，而质粒DNA为共价闭合环状分子；
当加热处理DNA溶液时，线状染色体DNA容易发生变性，共价闭环的质粒DNA在冷却时即恢复其天然构象；
变性染色体DN***段与变性蛋白质和细胞碎片结合形成沉淀，而复性的超螺旋质粒DNA分子则以溶解状态存在液相中，从而可通过离心将两者分开。
（二）基因组DNA的提取－ CTAB法
CTAB法原理
CTAB（hexadecyltrimethylammonium bromide，十六烷基三***溴化铵），是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，并与核酸形成复合物。
该复合物在高盐溶液中（> NaCl）是可溶的，通过有机溶剂抽提，去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。
注：CTAB溶液在低于15℃ 时会形成沉淀析出，因此在将其加入冰冷的
植物材料之前必须预热，且离心时温度不要低于15℃。
CTAB提取缓冲液的经典配方
组份
Tris-HCl （）
EDTA （）
NaCl
CTAB
β-巯基乙醇
终浓度
100 mM
20 mM

2%(W/V)
%（V/V）使用前加入
Tris-HCl （）提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏；
EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子，抑制DNase活性；
NaCl 提供一个高盐环境，使DNP充分溶解，存在于液相中；
CTAB溶解细胞膜，并结合核酸，使核酸便于分离；
β-巯基乙醇是抗氧化剂，有效地防止酚氧化成醌，避免褐变，使酚容易去除
（二）基因组DNA的提取－ CTAB法
CTAB提取缓冲液的改进配方
组份
Tris-HCl （）
EDTA （）
NaCl
CTAB
PVP40
β-巯基乙醇
终浓度
100 mM
20 mM

3%(W/V)
5%(W/V)
2%（V/V）使用前加入
PVP（聚乙烯吡咯烷***）是酚的络合物，能与多酚形成一种不溶的络合物质，有效去除多酚，减少DNA中酚的污染；同时它也能和多糖结合，有效去除多糖。
（二）基因组DNA的提取－ CTAB法