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分类号: 学号:20091038

理学硕士学位论文

河北安国 7 种中药材 AM 真菌
遗传多样性研究

学位申请人: 王雅丽
指导教师: 贺学礼教授
学位类别: 理学硕士
学科专业: 植物学
授予单位: 河北大学
答辩日期: 二○一二年六月
Classified Index: CODE: 10075
.: NO: 20091038

A Dissertation for the Degree of

AM fungal ic diversity in the
rhizosphere of seven medicinal plants
in Anguo of Hebei Province

Candidate: Wang Yali
Supervisor: Prof. He Xueli
Academic Degree Applied for : Master of Science
Specialty: Botany
University: Hebei University
Date of Oral Examination: June , 2012
摘要
摘要
为探明药用植物根围 AM 真菌遗传多样性,于 2010 年 8 月在河北省安国市
3 个样地(中药材种植基地、霍庄、大户村)用随机抽样法采集 7 种中药材根围土
壤样品,分离筛选双网无梗囊霉(Acaulospora bireticulata)为试验菌种,进行孢子
DNA 提取、PCR 扩增、序列测定及聚类分析,研究了双网无梗囊霉遗传多样性
与土壤因子、宿主植物之间的关系,并选取两条代表菌株所测序列,连同从 NCBI
数据库中下载的 4 属 28 种 AM 真菌相应序列构建系统发育树,并从土壤中提取
AM 真菌 DNA,纯化,PCR 扩增后进行变形梯度凝胶电泳(DGGE)分析。
取得的主要试验结果如下:
1. 自然条件下,7 种中药材植物根系均能与 AM 真菌形成良好共生关系。双网
无梗囊霉基因序列保持了高度稳定性,具有广谱性。
rDNA ITS 区测序及 Bioedit 序列分析表明,土壤条件和宿主植物对 AM 真菌 DNA
序列有一定影响,在真菌 ITS 区出现 0~8 个碱基差异,但 3 个样地 7 种植物双网无
梗囊霉 DNA 相似性在 %以上,基因序列保持了高度稳定性。说明双网无梗囊霉
对样地和宿主植物没有严格依赖性和选择性,在样地和植物间基因序列保持了高度
稳定性,其分布具有广谱性。
2. AM 真菌遗传多样性与土壤因子密切相关。
同一样地不同中药材双网无梗囊霉 DNA 相似性系数和土壤因子相似性很高,
不同样地同一中药材 AM 真菌 DNA 碱基序列相似系数低于前者,可见遗传多样性
与土壤因子密切相关。
3. 聚类分析结果显示,环境和土壤条件对双网无梗囊霉基因序列的影响大于宿
主植物的影响。
土壤因子比宿主植物对 AM 真菌群落影响更大。不同样地双网无梗囊霉 DNA
序列比较,大户村与霍庄相似性系数较高,AM 真菌在分子水平上无显著差异,这
两个样地先聚在一起,而种植基地与其他样地相似性系数较低,后聚在一起,样地
间土壤因子比较,大户村与霍庄相似,与基地差异大。进一步说明序列差异受土壤
因子影响大于宿主植物。可能是由于试验样地为农田土,采用人工施肥,同一样地
Ⅰ
摘要
土壤因子基本相同,且植物为 1 年生,故双网无梗囊霉 DNA 碱基差异受宿主植物影
响不明显。
4 本试验建立了检测土壤 AM 真菌群落的 PCR-DGGE 体系。研究结果表明,巢
式 PCR 反应的第一轮反应体系中土壤 DNA 模板量约 2-5ng。第二轮反应以第一轮扩
增产物原液为模板,在退火温度为 67℃时扩增的条带最为明亮。通过对 DGGE 体系
的优化得知,选用变性梯度为 40%-60%的聚丙烯酰胺凝胶在 90V 电压下电泳 7 h 分
离下的条带效果最佳,DGGE 图谱的条带分离结果清晰、丰富。
DGGE 分析结果表明,受样地和宿主植物共同影响,AM 真菌种群结构表现出
多样化。

关键词双网无梗囊霉系统发育 DGGE 遗传多样性土壤因子中药材
II
Abstract
Abstract
To eluc