文档介绍：摘要香蕉种质超低温保存研究植物学专业硕士研究生李俊慧指导教师何平教授陈晓玲副研究员摘要香蕉(Musa spp.)是大型的多年生草本果树,为热带亚热带发展中国家4亿多人提供了基本的食物来源。由于香蕉主要栽培品种多为三倍体,为营养性结实,所以其种质资源无法通过低温库进行种子保存。田间保存需要占用大片土地和消耗大量的人力物力,且易受到病虫害的侵袭。试管苗保存需要经常继代,易污染和发生体细胞变异。所以超低温保存是目前长期而稳定保存其种质的较好方法。本研究以香蕉离体茎尖为保存材料,对小滴玻璃化法超低温保存的影响因素进行了研究,并比较了小滴玻璃化法和玻璃化法超低温保存的效果,初步建立了适于香蕉种质超低温保存的技术方法,并对超低温保存后的再生植株进行了遗传稳定性的鉴定。主要研究结果如下: 、预培养、装载时间、PVS2处理时间、PVS种类等几个影响超低温保存的因素进行单因子试验,确定了每个因素的最佳处理,从而建立了小滴玻璃化法超低温保存的优化体系:选择在含609/L蔗糖的生根培养基上继代l~2个月的粗壮试管苗,剥取含有1"--2片叶原基的茎尖,在室温下用MS+2mol/L甘油+(30min'--4h),再在0℃下PVS2处理40--一50min,接着将茎尖转移至铝箔上的PVS2dx滴上,迅速装入盛满液氮的冷冻管中,然后投入液氮中保存。保存1h后,将铝箔取出投入MS+,几秒钟后将化冻的茎尖转入新的卸载液中洗涤15rain,然后转入 MS+,再转到MS+ BA的恢复培养基上暗培养 1周,之后转到光下培养。 (碧盛、巴西、东大、海贡、抗枯l号)。试验结果表明:5个品种用小滴玻璃化法保存后再生率都高于玻璃化法,平均高 %。其中碧盛、东大两个品种用两种方法保存后的结果差异显著。所以,小滴玻璃化法更适用于香蕉超低温保存。 ,每种基因组型的平均再生率为:ABB %,%,AAA %,AA %,ABBB %,AAB %。结果表明,各基因组型的冻后再生率没有显著差异,不同B基因组数目的品种间再生率也没有显著差异。两南大学硕十学位论文 II鼍曼曼曼曼曼曼曼曼曼皇曼曼舅曼曼曼曼鼍曼曼皇寡量鼍曼曼皇曼曼曼曼皇曼曼曼曼皇曼曼皇曼曼曼曼曼曼鼍置曼墨、分子生物学(SSR)两个方面对保存后的香蕉再生植株进行了遗传稳定性检测。结果表明:在形态上,再生植株的叶片大小、叶片颜色、‘叶片形状以及增殖与生根都和保存前植株没有显著差异;分别用2l对和19对SSR引物对碧盛,巴西两个品种的超低温保存前后植株的基因组DNA进行扩增,扩增产物的电泳图谱没有差异。由此可以基本确认超低温保存未改变香蕉试材的遗传稳定性。关键词:香蕉离体茎尖小滴玻璃化法超低温保存遗传稳定性 Abs仃act 鼍II;I=≈;_——————;一I—I一一一一i. 一——曼I曼曼曼曼皇曼曼曼曼 Studies on cryopreservation ofbanana (Musa spp.)germplasm Postgraduate ofBotany:Li Junhui Supervisors: Ping Associate Xiaoling Abstract Bananas(Musa spp.)are giant perennial herbsandprovide allessential food source for more than 400millionpeople throughout thedeveloping countries ofthetropics and cultivated bananas aretriploids(2n=3x=33)and seedlessplant itsgermplasm can not preserved through seedsinlow-temperature genebanL 111epreservation ofMusagermplasm has been maintainedthrough fieldcollectionofplants and invitroshoot method a safe andeconomical way forlong-term conservation ofMu