文档介绍：河南大学
硕士学位论文
PEG水凝胶接枝活性肽及其表面细胞粘附和抗菌性的研究
姓名:张林
申请学位级别:硕士
专业:微生物学
指导教师:张洪
201205
摘要本论文针对目前生物水凝胶存在的表面功能化问题,对聚乙二醇翰料表面进行光聚合接枝生物活性肽,提高其表面细胞相容性和抗菌性。分别接枝细胞粘附因子ò彼幔拾彼幔於彼幔堪彼、抗菌性杆菌肽,并对表面功能化的聚乙二醇航行∈笈咛コ上宋赴嗳菪浴⒔鸹粕咸亚菌抗菌性测试。本论文所做的工作主要有:孕蟹掷氲玫嚼ッ靼仔∈蟮某上宋赴蜕窬赴⑶夷芄欢苑掷胨玫降细胞进行培养、传代、冻存、复苏。为之后罕砻娓男韵赴掣绞笛樘峁┫ü艿ㄓ帽臼笛槭姨峁┑乃闹指锢际涎粜韵妇曰钚缘鞍赘司牡拿舾性进行初步检测,并从中选出敏感性显著、人体表面创口易感染的菌株金黄色葡萄球菌作为杆菌肽接枝罕∧ど虾蟮募觳饩辍褂貌煌肿恿康姆肿恿蕉擞兴ḿ腜大单体聚乙二醇双丙烯酸酯T希ü贤夤饩酆霞际踔票赋鲆幌盗形锢硇阅懿煌腜水凝胶薄菔笛橐G笊杓浦票噶俗R剖约罙甈.,并利用此转移试剂和二次光聚合技术把多肽接枝到罕∧ど希垢男院蟮腜水凝胶薄膜具有细胞粘附能力。...二苯基四氮唑溴盐ḿ觳了改性后罕∧ど系南赴钚浴菔笛橐G笊杓浦圃炝俗R剖约罙甈.,并利用此转移试剂和二次光聚合技术把杆菌肽接枝到罕∧ど希垢男院蟮腜水凝胶薄膜具有抗菌能力。通过ḿ觳饬烁男院驪水凝胶薄膜上的细菌活性。糜ü獍酚攵嚯牡牟被芄环⑸ü庀陨ǚ从Φ脑矶訮水凝胶薄膜表面接枝的多肽和杆菌肽进行荧光显色检查。通过荧光显微镜观察,验证了水凝胶薄膜表面成功地接枝上了多肽和杆菌肽。米R剖约梁投喂饩酆霞际醢讯嚯腞透司幕旌辖又Φ絇水凝胞源。膜,并测定了罕∧さ奈苷偷任锢聿问
胶薄膜上,通过ḿ觳饬烁男院驪水凝胶薄膜上的细胞和细菌活性。改性后的罕∧ぜ嬗邢赴じ胶涂瓜妇腥镜哪芰Α关键词:抗菌材料,海嚯腞司模喂饩酆
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组织工程的概念由美国的与旯餐岢鯥淇梢越馐臀S用工程学和生命科学原理,研究和开发能够修复和改善损伤组织结构与功能的生物替代物的一门学科。其方法是在体外分离培养相关的活细胞,然后将这些细胞种植到天然的或人工合成的细胞外基质上,再将此基质复合物移植到体内或在体外继续培养,使其形成具有一定结构和功能的组织或器官,最后移植到体内以替代损伤的组织或器官。组织工程由生物支架材料、细胞、活性因子三个主要部分组成:镏Ъ懿牧显谧橹こ讨杏凶胖匾5淖饔】。它能够为细胞组织提供所需的生成空间,便于细胞停泊生长;可以引导自体组织细胞再生;赋予新组织一定的形态及生物力学性能,并且支架材料往往是生物可降解材料。赴枪钩扇颂宓幕镜ノ皇亲橹こ讨踩胛锏纳慈#猿晒窍赴⑷骨细胞、成纤维细胞、肌键细胞、上皮细胞等构建的结构组织已有初步临床应用的报道赴钚砸蜃邮峭ü赴湫藕糯ǖ萦跋煜赴疃亩嚯囊蜃樱ㄏ赴掣因子、细胞免疫应答因子等。其中的细胞粘附因子短肽、纤粘连蛋白、胶原等可以影响细胞粘附、分裂增殖、迁移、基因表达等活动。在构建人体组织过程中,对目的细胞的生长调控是十分重要的一环。在生理条件下,活性因子往往是通过多种活性因子的连续协同作用方式来调控细胞。人体细胞馨拖赴瘸是贴壁依赖性的,在体外培养过程中,只有在铺有粘附因子等的材料表面,才能粘附、生长存活。细胞本身能分泌少量的粘附因子,但由于生物材料表面理化性质所限,这些分泌的粘附因子并不能牢固地吸附在材料表面,人工地在生物材料表面铺设或共价键接枝粘附因子等细胞活性因子,即组织工程表面功能化一直是组织工程研究中重要的课题。目前,生物材料不仅要有良好的生物相容性、可降解性,同时材料表面还要具有细胞活性因子等,在分子水平上刺激细胞产生特殊应答反应,这是目前“第三代”生物材料的功能特征【俊近年来,相比于聚乳酸、壳聚糖等刚性材料,兼有弹性和吸水性结构和性能各异的新型高分子水凝胶在组织工程中的应用引起了人们极大的兴趣。组织工程水凝胶按照它.
的来源可以将其分为天然和合成两大类。天然水凝胶包括明胶、胶原、纤维蛋白、透明质酸盐、琼脂糖和壳聚糖等。天然高分子材料制备的细胞支架具有较好的细胞相容性,所以天然水凝胶已经广泛应用于组织工程。但由于天然水凝胶来源不同,结构和性能存在批次差异,其物理机械性能较差,不能根据组织工程需要而对力学性能、降解时间等参数进行设计所以不适合大规模生产。合成水凝胶包括聚丙烯酸及其衍生物、聚乙烯醇、聚乙二醇、聚磷腈和多肽等】。合成水凝胶相对于天然水凝胶可以在比较大的范围内对水凝胶的结构和性质进行调控,其具有较好的物理机械性能,但生物相容性不好【。因此在合成水凝胶材料表面或本体中引入活性官能团以提高组织材料和细胞相容性就是非常必要的。在组织工程材料的实际应用中,生物材料在给临床治疗带来便捷的同