文档介绍：Sf9 培养要点：
温度： 27-28 摄氏度
pH：， sf9 最适的 ，随培养时间的延长， Ph 值会增加传代时间： 72h（三天左右）
细胞来源： Sf9（货号 B825-01）和 Sf21（货号 B821-01）细胞系是传统的用于杆状病毒表达
的细胞系，源于美国农业部昆虫病理实验室。此细胞系适用于 InsectSelect 系统。这两株细
胞衍生于 IPLBSF-21细胞系，来源于秋蝇蠕虫 （草地夜蛾） 蛹的卵巢组织。（以上来自 invitrogen ）
细胞特点：规则的带有颗粒球形。贴壁紧。
标准条件的定义：
培养最低密度： ×10 6/ml（健康对数生长期细胞活率至少应不低于
90％。活率低于 90％
细胞不是在最佳条件下培养不能用于实验）
1× 10 6/mL 将出现对数生长状态
传代培养：传代培养需将细胞调整到维持对数生长状态和最大活率。
贴壁培养 : 贴壁细胞传代需在细胞长成单层（如下定义）然后
1：5（细胞体积：最后培养
基体积）稀释维持对数生长。形成单层细胞可以传代培养
悬浮培养：在细胞密度达到 × 10 6-× 106 细胞 /mL 后将密度调整至
× 10 6 -× 10 6
细胞 /mL 进行悬浮传代。 确保传代细胞密度不高于
4× 106个 /mL 或保持密度高于 1× 10 6 个
/mL 以达到对数生长状态。
Sf9 悬浮培养所需要的细胞数
培养基： sf-900 Ⅲ SFM（添加 2%的血清减小感染过程中蛋白水解量）
培养瓶与培养体积：
冻存： 一旦细胞系建立且倍增规律则可以进行冻存。 细胞需达到 90％活率和 80-90 ％融合的
要求（如：低代次）推荐冻存几管。当融解细胞，它将会达到最佳使用状态。
1. 用细胞计数板计数细胞。需要足够的如上表所示密度的细胞冻存 2-4 管。细胞可是悬浮
或贴壁培养；
将无菌冻存管立于冰上，做好标记；
室温 400-600 ×g 离心 10min 。移除上清。
以给定的密度在冻存液中重悬细胞；
移取 1mL 细胞悬液置于无菌冻存管中；
置于 -20℃ 1h，然后移至 -80℃ 24-48h ；
储存于液氮中。
转染的细胞： 需要的是对数期的细胞＞ 95%发育能力，可以完成成功的转染。
载氧： 对于最优生长条件和蛋白的表达， 昆虫细胞要求被动的通氧。 积极的通氧系统要求溶
氧饱和在 10%-50%
Sf900II 和 sf900Ⅲ 的区别：一般推荐 Sf900II 来大量表达