文档介绍：（一）目的
了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性
学****掌握革兰氏染色技术，巩固学****光学显微镜油镜的使用方法
一、革兰氏染色法
02革兰氏染色法和芽孢染色法
2021/1/6
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（二）原 理
革兰氏染色法所以能将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性，是由这两类细菌细胞壁的结构和组成不同决定的。
当用结晶紫初染后，所有细菌都被染成初染剂的紫色。
碘作为媒染剂，它能与结晶紫结合成结晶紫一碘的复合物，从而增强了染料与细菌的结合力。
当用脱色剂处理时，两类细菌的脱色效果是不同的。
革兰氏阳性细菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成，壁厚、类脂质含量低，用乙醇脱色时细胞壁脱水、使肽聚糖层的网状结构孔径缩小，透性降低，从而使结晶紫-碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内，经脱色和复染后仍保留初染剂的紫色。
革兰氏阴性菌则不同，由于其细胞壁肽聚糖层较薄、类脂含量高，所以当脱色处理时，类脂质被乙醇(或***)溶解，细胞壁透性增大，使结晶紫-碘的复合物比较容易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染上复染剂的红色。
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（三）  材料
菌种 大肠杆菌，金黄色葡萄球菌
染色剂 结晶紫染色液、卢戈氏碘液、95%乙醇、石炭酸复红液。
 仪器或其他 显微镜、擦镜纸、接种环、载玻片、酒精灯、蒸馏水、香柏油、二甲苯。
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（四） 实验步骤
镜检
制片（涂片→干燥→固定）
染色（初染→媒染→脱色→复染）
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初染
滴加结晶紫(以刚好将菌膜覆盖为宜)于玻片的涂面上，染色1～2min ，倾去染色液，细水冲洗至洗出液为无色，将载玻片上水甩净。
脱色
用卢戈氏碘液媒染约l min ，水洗。
媒染
用吸水纸吸去玻片上的残水，将玻片倾斜，用滴管流加95%的乙醇脱色，直至流出的乙醇无紫色时（20－30Ｓ），立即水洗，终止脱色，将载玻片上水甩净。
复染
在涂片上滴加番红液复染约3min ，水洗，然后用吸水纸吸干。
乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节。
脱色不足，阴性菌被误染成阳性菌；
脱色过度，阳性菌被误染成阴性菌。
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镜检
干燥后，用油镜观察。
菌体被染成紫色的是革兰氏阳性菌（G+）；
菌体被染成红色的为革兰氏阴性菌（G-）。
Gram Stain of Staphylococcus aureus
Gram Stain of Escherichia coli
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A Gram Stain of a Mixture of Gram-Positive and Gram-Negative Bacteria.
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枯草芽孢杆菌
乳酸杆菌
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[注意事项]
1. 取菌时要严格无菌操作，接种环每取一次菌种后，都要及时灭菌。
，镜检以分散开的细菌的颜色为准，过于密集常常呈假阳性。
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（五） 实验结果
记录两种细菌（大肠杆菌，金黄色葡萄球菌）观察结果，绘出两种细菌油镜下的染色视野图。注明物镜放大倍数及总放大倍数。
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