文档介绍：幽和”弓,弼中国医科大学研究生学位论文独创性声明中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料,与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处,本人承担一切相关责任。论文作者签名:日期:本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定,即:研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国医科大学。本人保证毕业离校后,发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学,且导师为通讯作者,通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容C苣谌莩,以采用影印、缩印或其他手段保存论文。指导教师签名:期:砷籵日
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可富集肺腺癌细胞系中肿瘤干细胞目的·中文论著摘要·有的治疗手段没有清除这些决定复发和转移的关键细胞——肿瘤干细胞的缘故。肺癌是对人类健康危害极大的恶性肿瘤,我国是肺癌发病率较高的地区,尽管目前我国肺癌的发病率有下降趋势,但其发病率和死亡率仍高居恶性肿瘤首位。由于肺癌的发病机制不清,尚不能有效地预防其发生,因此探索肺癌发生的相关机制,寻找特异性的阻断和治疗方法一直是人们努力的方向。最近,大量实验证实存在少量维持恶性生长的并具备自我更新能力的细胞亚群,,肺癌,前列腺癌,结肠癌等多种实体瘤中证实了拇嬖冢虼耍荽搜低撇夥伟┮部赡芾丛从诟上赴且恢指上赴疾病。传统治疗方法虽然可使肿瘤体积明显缩小,有的甚至可达到完全缓解,但实际上大部分肿瘤经过一段时间的缓解期之后又会复发或转移,这可能是由于现侧群细胞琒是诙栽煅8桑嫦赴掷胧狈⑾,,可将玖螲馀胖料赴猓且具备自我更新、多向分化、成瘤性等一系列干细胞的生物学特征。肺癌细胞对一些化疗药物具有耐药性,且大部分耐药细胞被阻滞于期,而研究表明,肿瘤干细胞大多处于期。因此我们猜想,对表现出耐药性的细胞群中是否可能包含了大量的肿瘤干细胞。我们能否利用这一耐药模型来富集肺癌干细胞狙芯恐荚谔剿杂诜蜗侔┫。,
方法⒘魇较赴羌觳庀赴芷⒚庖哂ü馊旧盅〔嗳合赴⑾赴嘌⑺.,,和含有%牛血清琋琔信嘌,取对数生长期的肺癌细胞悬液进行细胞计数,分别接种于装迮嘌濉接种小时后加入各种处理因素。处理后第、、、小时分别加入痬绦跤小时后,每孔加入芙饨峋В舛ǜ孔吸光度。收集对数生长期细胞制成觯痬赴骸ダ湟掖加固定过夜、离心后制成的细胞悬液,加碘化丙啶染液于芄夥跤种雍笊匣测,软件分析细胞周期。接种细胞于孔板中,多聚甲醛固定,用%的诔N麓蚩分钟。サ腂常温封闭分钟。封闭完后加入一抗,埂4稳眨尤相应二抗,室温孵育鲂∈焙螅珼竞耍ü庀晕⒕倒鄄臁收集细胞,提取总蛋白,蛋白定量。电泳后将蛋白转印到膜上,然后用バ∨QG宸獗眨豢℃孵育过夜,二抗℃孵育∈焙驟发光,曝光胶片后,测定灰度值预热的培养液%蚻撼逡重悬,计数,至细胞密度为痬皇笛榉至阶椋阂蛔橄燃尤隫痬。,再加入荧光染料/反应涣怼橹苯蛹尤
结基质胶细胞侵袭试验⒖寺⌒纬赡芰κ笛、统计分析果⒙闶笾铝鍪笛荧光染料/从,洗涤并重悬,/舅劳细胞;紫外光源流式细胞仪进行检测及分选。用无血清的培养基将加入到孔径为的小室中,向小室的上室中加入南赴/率抑屑尤牒的血清作为趋化诱导剂,孵箱中孵育小时后取出,用无菌的棉签擦拭去上室的胶,滤膜经固定、染色后封片,镜检个高倍视野。将刚刚分选所得的和甋赴直鸾又钟诹装猓嘌恢茏笥医结晶紫染色计数形成的克隆数。克隆形成率的计算公式为:克隆形成数/接种细胞数%。从瓵赴抵蟹盅〕,计数,调整细胞浓度至痬扛雠ǘ冉又只/庖呷毕小鼠,注射后每隔两天观察一次长瘤情况,注射后天,断颈处死。,。结果提示:,对肺癌瓵赴陌胧种坡嘉蝝⑾赴芷诮峁崾荆篒饔糜诜蜗侔┫赴岛螅琒期细胞比例从.%减少至.%,期细胞比例从.%增加至.%。.及免疫荧光结果提示:可增强瓵赴上赴昙物的表达,在正常的肺腺癌瓵赴蠴,和负醪槐泶铮,
仅为%,二者差异显著畎。结论关键词在半数抑制率约为痬饔,