文档介绍：安徽医科大学
硕士学位论文
高脂血症模型小鼠睾丸生精细胞凋亡的研究
姓名:张凯
申请学位级别:硕士
专业:人体解剖与组织胚胎学
指导教师:吕正梅;贾雪梅
20100501
安徽医科大学硕士学位论文
高脂血症模型小鼠睾丸生精细胞凋亡的研究

摘要

目的:研究高脂血症对睾丸生精细胞凋亡的影响及机制。方法:将购买的 12 只
载脂蛋白 E(apolipoprotein E,ApoE)基因敲除的 C57BL/6J 雄性小鼠随机分成两
组:一组给予高脂饲料,制备高脂血症模型(高脂血症组);另一组喂饲高脂饲料,
并褪黑素(melatonin,MT)1mg/(kg· d)灌胃(MT 组);以 6 只 ApoE 基因野生型
C57BL/6J 雄性小鼠,给予普通饮食,作为对照组。喂饲 12w 后摘除眼球取血,测
量三组血脂水平,取睾丸组织进行以下研究:①石蜡切片 HE 染色;②超薄切片透
射电镜观察超微结构变化;③脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记
(Teminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling,
TUNEL)法检测睾丸组织凋亡细胞;④睾丸组织 Bcl-2 和 Bax 免疫组织化学染色并
进行计算机图像分析。结果:①高脂血症组血清 CHO(±)和 LDL-c
( ± )均明显高于对照组, 对照组分别为 ± 和
±,差异均具有统计学意义(P<),高脂血症模型构建成功;与
高脂血症组相比,MT 组血清 LDL-c(±)明显降低(P<), CHO 则
无明显变化(P>)。② HE 染色显示,高脂血症组小鼠睾丸生精小管基膜不完整,
厚薄不一,生精细胞层数明显减少,间隙增大,细胞排列混乱;MT 组睾丸结构基
本正常。③高脂血症组小鼠睾丸超微结构变化主要表现为:生精细胞线粒体肿胀
空泡变性,粗面内质网扩张,核糖体脱颗粒,胞内出现电子密度较高的异常结构;
支持细胞线粒体肿胀空泡化,核膜外侧出现致密沉淀物,胞内出现较大空泡;生
精小管基膜厚薄不均,成波浪式皱褶。MT 组超微结构基本正常。④TUNEL 结果显
示,各组均可观察到凋亡细胞。与对照组相比,高脂血症组生精细胞凋亡明显增
多(P<),多发生在精原细胞和精母细胞;MT 组凋亡细胞数较之高脂血症组减
少(P<)。⑤Bcl-2 和 Bax 在各组睾丸组织中均有表达。Bcl-2 主要表达于精母
细胞和分化中的精子细胞的细胞质,Bax 主要表达于精原细胞、精母细胞、支持细
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胞的细胞质、圆形精子细胞的细胞核中。与对照组相比,高脂血症组 Bcl-2 的表
达下调,Bax 的表达上调;与高脂血症组相比,MT 组 Bcl-2 的表达上调, Bax 的表
达下调,差异均有统计学意义(P<)。结论:高脂血症导致小鼠睾丸生精细胞
凋亡数量增多,细胞凋亡可能是高脂血症引起睾丸损害的机制之一,Bcl-2 和 Bax
参与高脂血症引起的睾丸生精细胞凋亡的调控。MT 可以减少由高脂血症导致的睾
丸生精细胞凋亡,对高脂血症引起的睾丸损伤具有很强的保护作用。

关键词高脂血症;生精细胞凋亡;Bcl-2;Bax;睾丸;ApoE 基因敲除

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Study of Germ Cell Apoptosis in Testis of Hyperlipidemic mice

Abstract

Objectives To investigate the effects of hyperlipidemia on testicular germ cell apoptosis
and involved mechanisms. Methods 12 ApoE-knockout C57BL/6J male mice were
randomly divided into two dietary groups: group 1 fed high-fat diet(Hyperlipidemic
group), and group 2 fed high-fat diet with the addition of melatonin(MT)
[1mg/(kg·d)](MT gro