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学号:2008103016 单位代码:10759
石河子大学
硕士学位论文
亚麻荠高效再生体系的创建及 KLU 转化亚麻荠
研究
学位申请人高立虎
祝建波
指导教师
申请学位门类级别理学硕士
学科、专业名称生物化学与分子生物学
研究方向植物基因工程
所在学院生命科学学院
中国·新疆·石河子
2013 年 6 月
Establishment the high efficient Regeneration system of Camelina
sativa (L.) Crantz and Studing on Transforming of the KLU gene
into Camelina sativa(L.) Crantz
A Dissertation Submitted to
Shihezi University
In Partial Fulfillment of the Requirements
for the Degree of
Master of Natural Science
By
Gao Li-hu
(Biochemistry and Molecular Biology)
Dissertation Supervisor: Prof. Zhu Jian-bo
June, 2013
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学位论文独创性声明
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研究生签名: 时间: 年月日
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研究生签名: 时间: 年月日
导师签名: 时间: 年月日
摘要
亚麻荠(Camelina sativa (L.)Crantz)属十字花科(Cruciferae)芸薹族(Sisymbrieae)
亚麻荠属(Camelina),在欧洲曾被广泛种植。二战过后,由于油菜的引入及亚麻荠总
体产量较低等原因,亚麻荠种植面积和总产量急剧下滑,甚至到了灭绝的地步。近些年
来由于亚麻荠具有抗旱、抗病虫害、耐盐碱等优良的农艺学特征;亚麻荠具有优良的油
料品质,种子油中含有丰富人体必需的多不饱和脂肪酸α-亚麻酸,与市场上普通食用油
相比具有更高的食用价值;同时其种子油作为潜在的新型生物燃料工业价值巨大。因此,
亚麻荠这一古老的油料作物重新被研究者重视起来。
本试验选用我国新疆野生小果亚麻荠(Camelina microcarpa)与从加拿大引进的亚
麻荠(Camelina sativa)的春性杂种亚麻荠为实验材料,详细研究分析了外植体,植物
激素浓度配比,外植体苗龄及硝酸银浓度等因素对亚麻荠再生能力的影响,结果表明取
5-6 天的亚麻荠无菌苗的子叶柄作为外植体,接种于 MS+BA( mg/L)+NAA()
分化培养基上,可以获得最高的芽再生频率(30%)和再生芽数( 个)。在此基础上,
试验研究发现硝酸银对亚麻荠再生效率影响不显著,低浓度的硝酸银( mg/L)对其
分化能力有略微提高。随着硝酸银浓度的提高,硝酸银对亚麻荠的分化能力反而起到抑
制作用。本研究成功创建了杂种亚麻荠的高效再生体系。
为了进一步提高亚麻荠的含油量,本研究成功克隆拟南芥胚珠组织特异性 INNER
NO OUTER 基因的启动子(pINO)和拟南芥细胞色素 P450 KLUH 基因(KLU),以
pCAMBIA2301 为起始载体,构建 pCambia2301::pINO::KLU 植物表达载体,通过电转化
法将其转入根癌农杆菌 GV3101。通过农杆菌介导的 Floral dip 法转化亚麻荠,试验确定
了 Kan 最适筛选浓度为 50 mg/L,并详细研究分析了农杆菌液浓度、渗入缓冲液对亚麻
荠转化效率的影响,结果表明农杆菌液培养至