文档介绍：第三军医大学
博士学位论文
TLRs激动剂对红外期疟原虫发育的影响与机制研究
姓名:陈继德
申请学位级别:博士
专业:病原生物学
指导教师:黄复生
20090501
激动剂对红外期疟原虫发育的影响与机制研究要摘疟疾是蚊媒传播的严重危害人类健康的热带传染病,在全世界人群中具有很高的发病率和致死率。按蚊叮刺时将疟原虫子孢子注入宿主体内,随后子孢子进入血液循环,并可在数分钟后迅速侵入肝细胞。经短暂的红外期增殖发育,裂殖子再次进入血液循环、侵入红细胞导致疟疾临床发作。疟原虫在红外期的增殖发育是疟疾生活史中的重要阶段,而阻断虫体在肝脏内的增殖发育,即可防止疟原虫红内期感染。另外,红外期休眠子的存在是导致间日疟原虫临床病例复发的重要原因。因此,红外期是制定干预疟原虫感染措旌的理想时期,阻断红外期疟原虫生长发育能从源头控制疟原虫的感染。然而,子孢子经按蚊叮咬注入宿主后,必须且只有侵入肝细胞并在肝细胞内进行发育。鼠疟在肝细胞内蠓⒂墒欤婧蟾蜗赴鸾テ屏巡⑹头懦隽阎匙印M伺钡暮是疟原虫侵入宿主的早期,周期短暂,宿主不能及时产生适应性免疫,主要依赖天然免疫抑制子孢子入侵肝细胞。在子孢子侵入过程中,大量的天然免疫细胞,如受体是天然免疫细胞的重要模式识别分子,其介导的信号是天然免疫的重要组成部分。不同的能识别不同的病原体成分,如识别脂毒琓侗鹬嗵,,促进几一、幻逫等炎症因子的大量分目前尚无有效的红外期疫苗和预防药物,迫切需要新的疟疾防治手段和策略。外期周期约为堋嗵欤阎匙咏胙R貉泛蠓⒂珊炷谄谂痹妫ú换嵩俜回肝脏。红内期疟原虫能够反复感染红细胞,宿主能够产生适应性免疫。然而,红外期认赴患せ睿ü赴拘в蚍置谙赴蜃覫、Ⅲ丫、Γ【等抑制疟原虫子孢子感染肝细胞,并能够影响和赴院焱馄谂痹娴拿庖哂答类型。因此,天然免疫对抑制红外期疟原虫发育十分重要,探讨宿主天然免疫抗红外期疟原虫机制是制定新的疟疾防治措施的前提。蛋、磷壁酸,和酵母聚糖琓侗鸩子化合物如咪喹莫特偷チ碦,而特异性识别细菌械姆羌基化甇序列。表达于多种天然免疫细胞,如巨噬细胞,细胞,赴等。这些天然免疫细胞能在感染早期通过受体识别入侵的病原体而被活化,进而第三军医大学博士学位论文
泌,从而抑制病原体的增殖和扩散。研究证实,信号通路提前活化后能有效地抑制弓形虫、细菌和病毒的感染。然而,目前还没有资料显示提前活化信号通路能否影响且有效抑制红外期疟原虫的增殖与发育。本研究通过约氏疟原虫./∈竽P停愿卧喑婧珊驮嫜V⑽<觳庵副辏不同激动剂在红外期疟原虫增殖发育中的作用进行研究。其实验内容和结果主要基因的生物信息学分析,。以约氏疟原虫一/∈竽P停ü、鐾僖合僮渔咦感染小鼠的肝脏虫荷进行定量分析,:在单个激动剂尾静脉注入小鼠螅个量下部分激动剂能够显著抑制红外期疟原虫的发育,而部分激动剂对红外期疟原虫的发育无显著影响,反而对红内期的疟原虫发育具有一定的促进作用:诘攘縏ざ恋淖饔孟拢琓蚑ざ聊芄幌灾免疫应答在抑制红外期疟原虫增殖发育中具有重要的作用。包括以下四个方面:一、构建约氏疟原虫重组质粒:通过对多种疟原虫的特异性引物并进行分子克隆。重组质粒测序结果显示该片段长度为瑽分析发现它与约氏疟原虫株相似性为%。二、,设计匾煨缘囊锖蚑秸耄⒂胄∈驡锖蚑秸牍餐槌珊焱馄谂痹鍾猼觳为个子孢子剂量感染的小鼠肝脏虫荷。三、以—;。低车亩圆煌琓ざ猎诤焱馄谂痹嬖鲋撤成熟的唾液腺子孢子再注入小鼠,部分小鼠在疟原虫感染后〕龈卧嘟蠷畉治觯糠中∈笤谂痹娓腥竞炷诮性嫜V⒓觳椤=峁允荆诟眉减少小鼠的肝脏虫荷,其中以激动剂的作用最强,不仅能够将鐾僖合僮渔子感染小鼠的肝脏虫荷减少约%,而且还能推迟红内期原虫血症的出现。当增加疟原虫子孢子感染剂量后,肝脏虫荷和原虫血症均有一定的增高,但与对照组相比,激动剂均能显著减少肝脏虫荷及延迟原虫血症发生。因此,活化信号通路诱导的肫渌ざ料嗤亮康腡蚑ざ炼耘痹娓腥拘∈蟮母脏虫荷变化无显著影响。然而,原虫血症结果显示,激动剂处理组小鼠的红内期原虫血症在感染旌蟾哂诙哉兆椋崾炯せ頣藕磐房赡苡欣诤炷谄谂痹第三军医大学博士学位论文
甌ざ劣肟莘裣赴嚎莘裣赴外期疟原虫的发育;然而,薹ㄍ耆齌ざ恋囊种谱饔茫崾綯在进一步研究中发现,,,其中激动剂抑制作用最强,能够显著抑制疟原虫感染小鼠的肝脏虫荷并推迟原虫血症的出现。深入研究发现激动剂通过增强细胞激活信号通路,提示红内期疟原虫可能存在激动剂。这些结果对于我们认的关系,并可为疟疾免疫防治提供理论依据。关键词:疟原虫,红外期,,激