文档介绍：贾翲细胞凋亡机制的初步研究月广州课题来源:学位申请人教答辩委员会主席答辩委员会成员放射医学论文评阅人自选专称指导周美娟丁振华教授陈晓光教授李雪谦主任技师邹剑明主任医师杨宇华主任医师冯瑞林副主任医师梅曼彤教授王小菁教授黄耀熊教授南方医科大学级博士学位论文业师名
\韭贾翲细胞凋亡机制的初步研究博士研究生:周美娟指导老师:丁振华摘要臭氧是由太阳辐射使氧分子分解后,一个氧原子和另一个氧分子结合而成,是地球大气层中的一种蓝色、有刺激性的微量气体,也是平流层大气的最关键组成组分。尽管臭氧层在地球表面只占大气层的百万分之几,却吸收了来自太阳%的高强度紫外线,;ち巳死嗪蜕锩庠庾贤庀叩伤害。但是由于一些自然因素,以及一些人类活动对环境的影响,使地球上方的臭氧层遭到破坏继而出现大面积的臭氧空洞,臭氧空洞形成无疑会导致大气层对来自太阳的紫外线的阻挡作用大大减弱,使辐射到地球上的紫外线增强,从而对生物产生一些危害效应。年拢霞ǔ粞蹩斩吹拿婊锏平方公里,总面积超过了鲋泄遥菘蒲Ъ颐窃ぜ疲诮窈蟮年中的时间内,臭氧空洞仍有可能恶化。虽然现在全球都在采取一些必要的措施如在制冷剂中使用氟利昂的替代品等的来努力减少对臭氧层的继续破坏,甚至在将来有可能使地球上方的臭氧层空洞得以修复,但是据世界卫生组织估计,地球上的动物、植物以及浮游生物等在未来的昀锘菇ɑ崾艿皆嚼丛多的紫外线特别是紫外线姆渥饔茫獠唤龆匀死嗟慕】当旧碓斐晌:Γ如皮肤癌症、机体免疫的损害、晶体甚至视网膜的损伤等,而且会对人类的生存环境也能造成不可估量的影响。来自太阳的紫外线按其波长的不同可分为波长:长:ǔぃ一三种紫外辐射。由于大气层的阻挡作用,所有的痛笤サ腢能被臭氧、水汽、氧和二氧化碳吸收,博士学位论文
蚪仙偈艿酱笃挠跋欤虼耍酱锏孛娴淖贤庀咧饕J荱和少量同时,地球上方的臭氧层对紫外线的吸收作用急剧下降的区域,为的范围内,此即牟ǔし段В簿褪撬担厍虺粞醪愕钠苹担岬贾碌酱地球表面的牧垦杆僭黾樱虼薝对生物体的损伤作用,越来越得到世界各国的关注。人类的皮肤覆盖于机体表面,是抵抗外界损伤的第一道防线,会比其他器官接受更多来自外界环境的辐射例如紫外线及可见光的辐射。照射到皮肤的紫外线%的被角质细胞所吸收。环境中脑黾樱抟苫峒又囟云し艚侵氏赴损伤,例如引起皮肤红斑和炎症反应。因此,本实验中选用了人永生化上皮细胞细胞魑Q芯慷韵螅圆ǔの的魑8稍ひ蜃樱钊胙究饔糜谙赴缶啥嘀中藕抛5纪范鹘谙赴芷诘幕啤R酝难究表明,辽倏梢酝ü率鏊闹滞揪镀苹迪赴恼9δ堋⒂跋煜赴纳状况如导致细胞的坏死或凋亡等:憾韵赴鸇的直接损伤;杭せ钌窬磷脂酶使之降解神经鞘磷脂,从而导致“第二信使”神经酰胺及其衍生物水平增加;夯罨赴け砻娴乃劳鍪芴迦鏑龋:经由对细胞膜和线粒体膜的作用而产生自由基和脂质过氧化产物。那么,饔糜贖细胞,终究是通过哪些机制引起赴鹕诵вΓ婕暗組藕磐揪兜哪男┩呢,又有哪些信号分子涉及到其作用机制中呢獬闪宋颐堑氖笛楣刈⒌囊桓重点。本研究分三个阶段,首先在实验一中用不同剂量的丈銱细胞,并在丈浜笤诓煌氖奔涞悖鄄炝讼赴幕钚浴⑾赴蛲龅谋浠榭觯观察了/、、—确肿拥谋浠榭觯缓蟾菔笛一发现的—泶镌赨照后出现改变的现象,以及文献调研总结出的谙赴蛲觯芷谧柚椭械淖饔茫衔NA私窈蠼徊缴钊胙芯赨导致的细胞信号通路中的作用,建立鞍赘扇藕透弑泶锏赴晔欠浅S斜匾5模虼私辛耸笛槎褪笛槿难芯浚捶直鸸菇摘要Ⅱ
榷ǜ扇藕臀榷ǜ弑泶锏腍细胞株。目的:⑻教謕信号途径是否参与了贾碌南赴蛲黾捌渥饔没疲⑻教諩信号途径是否参与了贾碌南赴蛲觯⑻教諹照射后,表达情况;⒐菇扇拍孀B疾《驹靥澹⑵湮榷ㄗH镜腍细胞系;孀B疾《驹靥澹⒔⒏弑泶腍细胞系。方法:本研究方法主要包括三部分。第一部分⒁訦细胞为实验材料,“ü鄄霩细胞受到、、、的丈浜螅直鹪谡蘸、的细胞存活率;细胞接受假照、以及直鹫丈銱细胞、、、、谡蘸、肏玖隙訦细胞进行染色,并用荧光显微镜观察赴蛲龅那榭觯腢射线照射赴谡蘸收集细胞,并用免疫印迹法观察/、等蛋白的表达改变情况;⒎直鹩貌煌亮假照、丈銲丈銱细胞,在照后收集细胞和用的丈銱细胞,在照后、、、、、占赴崛∠赴淖躌,并通过反转录醋B汲蒫%的琼脂糖凝胶电泳,观测表达情况的遵循杓频脑颍谙靶位点设计并合成三对博士学位论文了
的干扰片段,。畆./柿W;酱蟪Ω司鶧妇迥诮兄柿@增,菌落ǎ秆〕龅难粜钥寺〗胁庑蚣ā⒎直鸾ú庑蚪峁允菊返闹柿Mü齃删瞬转细胞ü齱免疫印迹法筛选出干扰效果最好的质粒,用该质粒转化杲徊浇兄柿@┰觥=ɑ竦玫柿:蚉包装质粒、赴才嘌进行病毒包装和扩增,获取逆转录病毒载体。⒔ɑ竦玫哪孀B疾《驹靥甯腥綡术细胞,共感染三次,经持续压力筛选后,获得榷ǜ扇诺腍细胞株。⑽Q橹じ扇判Чü齱免疫印迹和实时荧光定量的鉴定膍偷鞍椎谋泶锴榭觥第三部分、首先通过对提供的蛉ǔば蛄薪械姆治觯⑾蚩捎肂兴盖校⒅糜