文档介绍：分类号:R5 单位代码:10752
密级:公开学号:2009218
宁夏医科大学
硕士研究生学位论文
Mitofusin2 基因对大鼠
血管平滑肌细胞 A7r5 凋亡作用的研究
Study on the Effect of Mitofusin2 on A7r5 Cell Apoptosis
学位申请人: 王小婕
指导教师: 何军副教授
申请学位门类级别: 医学
专业名称: 内科学
研究方向: 动脉粥样硬化机制
所在学院: 临床医学院
论文完成日期: 二○一二年四月
宁夏医科大学研究生院
Ningxia Medical University
Thesis for Application of Master’s Degree
Study on the Effect of Mitofusin2 on A7r5 Cell Apoptosis
Student’s Name: Wang Xiaojie
Supervisor: He Jun
Subject Category: Medicine
Major: Internal Medicine
Specialty: Atherosclerosis
College: Clinical Institute
Completion Date: Apr. 2012
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年月日年月日
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年月日年月日
宁夏医科大学硕士研究生学位论文中文摘要
Mitofusin2 基因对大鼠
血管平滑肌细胞 A7r5 凋亡作用的研究
摘要
目的研究外源性线粒体融合蛋白 2 基因(Mitofusin2,Mfn2)对大鼠主动脉平滑肌
细胞 A7r5 凋亡的影响,并对其可能的分子机制进行探讨。
方法将重组质粒 pEGFP-mfn2 在阳离子脂质体 Lipofectamine 2000 的介导下体外
转染 A7r5 细胞, 将细胞分为三组:空白对照组(control 组,未转染)、空载体对照组
(pEGFP–N1 组,转染空质粒)和实验组(pEGFP–mfn2 组,转染 pEGFP–mfn2)。转染
后,用流式细胞仪(FCM)测定转染效率。分别于转染后 48h 收获三组细胞,采用 Western
blot 检测 Mfn2 的表达。采用 Hoechst 染色激光共聚焦显微镜、Annexin V-PE/ 7-AAD
双染流式细胞仪及一步 TUNEL 细胞凋亡检测法观察 Mfn2 对 A7r5 凋亡的影响并计算凋亡
率。Western Blot 方法检测三组细胞中凋亡相关因子 Bcl-xl、Bax、Caspase-9 以及磷
酸化 Akt(p-Akt)和磷酸化 Bad( p-Bad)的表达。采用方差分析对数据进行统计学处理。
结果以流式细胞仪测定转染效率,pEGFP–N1 组和 pEGFP–mfn2 组于转染 48h 转染
效率达到最高,分别为(±)%和(±)%,两组比较差异无显著性(P
>)。Western blot 检测显示,pEGFP–mfn2 组 Mfn2 蛋白表达水平增高,其半定量
结果为(±),control 组和 pEGFP–N1 组 mfn2 蛋白表达半定量分别为(
±)、(±),pEGFP–mfn2 组与两对照组比较差异均有显著性(均
P< )。Hoechst 染色激光共聚焦