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人细小病毒B19 Real-time PCR检测方法的建立及应用.pdf

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上传人:coconut 2014/6/19 文件大小:0 KB

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文档介绍

文档介绍:茹办呈◎硕士学位论文论文题目:人细小病毒觳夥椒的建立及应用.—分类号:密级:单位代码:作导合作导师年学号:者专业师
论文作者签名:埠日论文作者签名:—垄塑际η┟日期:竺:矿原创性声明本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。关于学位论文使用授权的声明本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅;本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。C苈畚脑诮饷芎笥ψ袷卮斯娑
录目中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯符号说明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯第一部分:人细小病毒觳夥椒ǖ慕ⅰ材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯结讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯第二部分:人细小病毒蜃榈目寺结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯致洹攻读硕士学位期间发表的学术论文目录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯山东大学硕士学位论文舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯刚——辏狫
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人细小病毒病毒之前被认为是细小病毒属中唯一对人类有致病性的病原觳夥椒ǖ慕⒓坝τ业:病原生物学硕士研究生:李萌师:洪涛研究员指导教师:,,一般通过呼吸道进行传播,也可经输血、。诜⑾中碌牟《綪、筒┛体【,可引起儿童的传染性红斑谖宀,在成人中可引起关节炎和关节病,感染孕妇可造成胎儿水肿及胎儿先天性贫血,严重时可导致胎儿死亡,对免疫缺陷患者会导致慢性贫血,短暂的再生障碍性危象等严重疾病,因此建立人细小病毒募觳夥椒ㄊ直匾!目前针对细小病毒募觳夥椒ㄖ饕S醒G逖Ъ觳夂蚉检测,分别针对血清中存在抗体和病原核酸进行检测。腜检测方法主要包括:,觳夥椒由于其灵敏度高,特异性好,定量准确,并且具有实时监测和高通量的优势,是怂峒觳獾闹匾9ぞ摺H绻诤怂崽崛√逑抵屑尤肓司赫阅诙哉眨赫蚰芄挥行Э刂坪怂崽崛『蚉扩增效率的差异,有利于排除假阴性结果。本研究首先建立了添加内对照的觳夥椒ǎ焕酶方法检测人血清,获得了两个怂嵫粜匝荆蝗缓笊杓屏硕嗵滓铮褂巢氏右环菅粜院怂嶂锌寺〕つ┒以外的ǔば蛄校玃得到的基因片段连接到甌载体上,再使用预先设计好的酶切位点将所有片段连接起来得到幕蜃椤山东大学硕十学位论文—
人细小病毒觳夥椒ǖ慕一、.实验目的:《竞怂岬提取方法,比较几种试剂盒的核酸提取效率,选择核酸获得率较高的一种:根据蛄幸约癛<觳獾男蛄猩杓扑奶跻铮氐由霵方法合成片段,,使用相同方法构建重组质粒作为竞争性内对照赫阅诙哉沼胙粜远哉盏区别仅在于探针结合序列不同⒈曜记撸范ㄑG搴怂崽崛∈蹦诙照的添加量,〔《綛的方法,使用建立好的方法进行血清标本检测。结果:确定了血清中病毒核酸的提取方法,分别成功构建了两种重组质粒,〔《綛觳夥椒ǎ槊舳却G澹欢菅G逖窘辛松秆。玫搅份粜员瓯尽=崧郏航⒘巳讼感〔毒ü舛縋检测方法,可以用于人血清募觳狻二、蜃榈目寺实验目的:分段克隆蜃樾蛄校⒔淦唇映赏暾牟《净蜃椤方法:参考⒈淼腂基因组序列,依据单一限制性内切酶位点选择了鑫坏,将全长基因组分为危簧杓套巢式铮訠阳性核酸嗪臢为模板,使用巢氏┰段蛐蛄校幌冉锟寺〉ê螅行蛄胁舛ǎ然后利用选定的限制性内切酶将克隆得到的片段依次酶切和连接,获得基因组。结果:获得除长末端重复序列獾腂基因组,并拼接得到质粒瓸浜械腂