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文档介绍：福建医科大学
硕士学位论文
Notch1信号对神经胶质瘤U251细胞粘附和迁移的影响及其机制
的研究
姓名:王新洋
申请学位级别:硕士
专业:生物化学与分子生物学
指导教师:郑志竑
2011-05
福建医科大学硕士研究生毕业论文
Notch1 信号对神经胶质瘤细胞粘附和迁移的影响及作用机制的研究
中文摘要

目的:
1、观察 Notch1 基因对人类神经胶质瘤细胞 U251 的粘附和迁移能力的影响;
2、探讨 Notch1 基因影响 U251 细胞粘附和迁移能力的机制。
方法:
1、利用 Notch1-shRNA 和 pNL-NICD/EGFP 慢病毒感染人胶质瘤 U251 细胞,
RT-PCR 和 Western Blotting 法筛选和鉴定 Notch1 表达下调或 Notch1 胞内段(Notch1
intracellular domain, NICD)表达上调的 U251 细胞。
2、通过纤连蛋白(Fibronectin,Fn)细胞粘附试验、划痕试验观察各组细胞
的粘附和迁移情况。
3、应用 RT-PCR 和 Western blotting 法检测各组细胞中 N-cadherin、αN-catenin
和β-catenin 基因的表达,分析 Notch1 对三者的影响。
4、采用免疫共沉淀的方法检测 N-cadherin、αN-catenin 和β-catenin 三者的相
互关系。
结果:
1、Notch1-shRNA 慢病毒表达载体能有效下调 U251 细胞 Notch1 的表达,而
pNL-NICD/EGFP 慢病毒表达载体能显著上调 U251 细胞 NICD 的表达。
2、通过 Fn 试验、划痕试验观察到,Notch1 下调的细胞粘附力显著增强,迁
移力明显减弱;而 NICD 上调的细胞粘附力明显下降,而迁移力显著增强。
3、Notch1 下调和 NICD 上调的细胞 N-cadherin、β-catenin 的 mRNA 和蛋白的
表达与对照组比较均无明显变化。而在 Notch1 下调细胞中,αN-catenin mRNA 和
蛋白的表达与对照组相比明显增加,在 NICD 上调的细胞中αN-catenin mRNA 和
蛋白的表达与对照组相比显著降低。
4、利用β-catenin 抗体进行的免疫共沉淀实验,能够同时检测到 N-cadherin 和
αN-catenin,用αN-catenin 抗体进行免疫共沉淀,也能够同时检测到 N-cadherin 和
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β-catenin。
结论:
1、 Notch1 基因与人神经胶质瘤 U251 细胞的粘附、迁移能力密切相关。Notch1
下调的细胞粘附力显著增强,迁移力明显减弱;而 NICD 表达上调的细胞粘附力
减弱,迁移能力增强。
2、在神经胶质瘤 U251 细胞中,N-cadherin、αN-catenin 和β-catenin 三个蛋白
之间存在相互作用。Notch1 信号可能通过上调αN-catenin 的表达水平,影响
cadherin/catenin 复合体从而改变 U251 细胞的粘附和迁移能力。

关键词:神经胶质瘤;Notch 信号通路;粘附;迁移;cadherin/catenin 复合体




















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The Effect and potential Mechanism of Notch1 Signal on Adhesion and
Migration of Human Glioma Cells
Abstract
Objective:
1. To observe the effect of Notch1 signal on the adhesion and migration of human
glioma U251 cells.
2. To explore the mechanism of Notch1 Signal on Adhesion and Migration of
Human Glioma Cells
Methods:
1. The lentiviral vectors, which expressed Notch1 shRNA or Notch1 intracellular
domain (NICD), were used to transfect