文档介绍：二、基本原理
血清中的谷-丙转氨酶（ALT），在37℃、，可催化基质（底物）液中的丙氨酸与α-酮戊二酸反应生成谷氨酸和丙酮酸：
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实验十二谷丙转氨酶活性检测
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生成的丙酮酸可与起终止和显色作用的2,4二硝基苯肼发生加成反应，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，进而在碱性环境中生成红棕色的苯腙硝醌化合物，其颜色的深浅在一定范围内与丙酮酸的生成量，亦即与ALT活性的高低成正比关系。据此与同样处理的丙酮酸标准液相比较，便可算出或通过标准曲线查出血清中ALT的活性。
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实验十二谷丙转氨酶活性检测
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实验十二谷丙转氨酶活性检测
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* 仪器
1. 5×15cm试管、刻度吸量管。
2. 恒温水浴、离心机、721型分光光度计。
* 试剂
⑴：·
解于蒸馏水中，并稀释至1 000ml,4℃保存。
⑵：，稀释至1000ml,
4℃保存。
⑶/L磷酸二氢钾溶液80ml混和即
。加氯仿数滴，4℃保存。
三、仪器与试剂
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实验十二谷丙转氨酶活性检测
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2. 标准丙酮酸（）
取标准丙酮酸钠10mg，用上述缓冲液准确定容为50mL。此液须当日用当日配。
3. ALT底物液(含α-酮戊二酸2μmol/ml及DL-丙氨酸200μmol/ml) 取α-，DL-丙氨酸7g ,用试剂1溶成100ml，在稀释到刻度前，以1mol /L （），加数滴氯仿防腐。此液于冰箱保存可使用4天。
4.
取分析纯2,，用1mol /L HCl溶于100ml，置棕色瓶中保存。
5. NaOH溶液 常规配制。
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实验十二谷丙转氨酶活性检测
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1、血清样品制备
取鸡血100mL于4oC静置10hr，后经离心分离得到血清，
保存于冰箱中待用(由于血细胞中转氨酶活性较血清中
高，故应防止溶血；若血清中此酶活性过高，则可适
当稀释后再用) 。
2、标准曲线制作
取6支干燥洁净的试管，按下表操作，得出实验结果。
以吸光度值为纵坐标，酶活力单位数为横坐标，在坐标
纸上绘制标准曲线。
四、实验操作
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实验十二谷丙转氨酶活性检测
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3、血清样品谷丙转氨酶活性的测定
取4支干燥洁净试管，按下表操作（血清和底物溶液
事先保温10min）：
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实验十二谷丙转氨酶活性检测
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五、实验结果
1、将得出的吸光值在标准曲线上查得酶活性
2、计算：
丙酮酸物质的量（μmol）
SGPT活性单位/100mL= ×1000
时间（min）
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实验十二谷丙转氨酶活性检测
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1. 在测定SGPT时，应事先将底物、血清在37℃水浴中
保温，然后在血清管中加入底物，准确记时。 2. 标准曲线上数值在20~500U是准确可靠的，超过
500U时，需将样品稀释。 3. 转氨酶只能作用于α－L－氨基酸，对D－氨基酸无
作用。实验室多用α－DL－氨基酸（较L－氨基酸
价廉），若用L－氨基酸，则用量减半。 4. 溶血标本不宜使用，因血细胞中转氨酶活力较高，
会影响测定效果。 5. 血清样品的测定需在显色后30分钟内完成。
六、注意事项
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实验十二谷丙转氨酶活性检测
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