文档介绍：斐林试剂甲乙两液使用方法探索苏宏鑫(浙江省温州中学生物组 325014 ) 摘要本文通过理论分析和实验验证相结合,比较分析了在鉴定可溶性还原糖实验中斐林试剂甲乙两种试剂的不同使用方法及其效果。结果显示,在鉴定可溶性还原糖的实验步骤中,斐林试剂甲液(2mL) 和乙液(4滴) 无论是先混合马上使用,还是两液依次加入被鉴定的可溶性还原糖中都能得到相同的实验效果。 1 问题的提出全日制普通高中教科书( 必修) 《生物》第一册第 18 页,在鉴定可溶性还原糖的方法步骤中, 特别强调“必须将斐林试剂的甲液和乙液混合均匀后使用,切勿分别加入生物组织样液中进行检测”。笔者在为学生上这一节实验课时,由于对上述步骤难以找到合理的解释,所以就想到在鉴定可溶性还原糖时,斐林试剂的甲液 2mL 和乙液 4滴分别加入,或斐林试剂的甲液(2mL) 和乙液(4滴) 混合 24 小时后使用,能否得到同样的效果?带着这两个问题笔者进行了以下探讨。 2 实验探索 实验仪器和试剂仪器和试剂与教材中完全相同。 实验设计 在以下各组实验中, 都是苹果样液 2mL , 斐林试剂甲液 2mL 、乙液 4 滴,即使是甲、乙液混合配制的斐林试剂也按照这个比例。 设计四组实验利用加入 2mL 刚配制的斐林试剂( 甲液 2mL 与乙液 4 滴混合均匀) 作为对照; 另外再做三组实验:①加入 24h 前配制的斐林试剂( 甲液 2mL 与乙液 4 滴混合均匀);②先加入 2mL 斐林试剂甲摇匀后再滴入 4 滴斐林试剂乙; ③先加入 4 滴斐林试剂乙摇匀后再加入 2mL 斐林试剂甲。 实验的具体方法及步骤在其他实验方法及步骤不变的前题下,分别在 A、B、C、D 四支试管中各加入 2m L 苹果组织样液, 然后在A 试管中加入 2m L 刚配制的斐林试剂, 在B 试管中加入 2mL24h 前配制的斐林试剂,在C 试管中先加入 2mL 斐林试剂甲摇匀后再滴入 4 滴斐林试剂乙,在 D 试管中先加入 4 滴斐林试剂乙摇匀后再加入 2mL 斐林试剂甲。上述四支试管摇匀后一同放入 100 ℃的沸水中加热, 并观察四支试管中溶液颜色的变化。重复上述实验三次。 实验结果三次重复实验的结果完全一致, 重复性好, 结果可靠。具体是:A、C、 D 三支试管的颜色变化, 从颜色的变化速度与程度两方面都完全一样, 凭肉眼根本无法区别; 颜色变化顺序是: 从蓝色→棕色→砖红色, 其中棕色不太明显,时间又短;变色的时间为:约 20s 钟有明显的变色, 80s 钟砖红色显著。 B 试管的颜色变化明显缓慢,并且 15min 时,还是呈黑红混合色。 3 理论依据 查阅资料《有机化学》东北师大等(1997 年 12 月版) 下册第 586 页:葡萄糖、果糖和甘露糖三者在稀碱液中能发生***式- 烯醇式的互变异构;氢氧化铜或氧化铜在碱性溶液中能将单糖氧化, 同时氢氧化铜或氧化铜被还原成砖红色的氧化亚铜沉淀。《生物化学》王镜岩等(2002 年9 月第三版) 上册第 16页:在碱性溶液中,重金属离子(Cu 2+、 Ag +、 Hg 2+或 Bi 3 +等) 如斐林试剂中的 Cu 2+ 是一种弱氧化剂, 能使醛( 还原剂) 的醛基氧化成羧基, 产物称醛糖酸, 金属离子自身被还原。单糖在碱的催化下