文档介绍：实验九卵磷脂的提取、纯化和鉴定
2008年12月
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1、学****和掌握卵磷脂的提取和鉴定方法；
2、掌握薄层层析的原理、方法和应用。
一、实验目的
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是细胞膜磷脂双分子层的重要成分。
卵磷脂又称磷脂酰胆碱，是甘油磷脂的一种。在动植物体内均有分布，在动物的脑、精液、心、肝、肾上腺和卵细胞中含量较多，蛋黄中含量可达8-10％。
其结构式为：
胆　碱
HO
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磷脂易溶于***、苯、***仿，部分溶于乙醇，极难溶于***；卵磷脂溶于乙醇、甲醇、***仿等有机溶剂，但不溶于***；***能够溶解油脂和游离脂肪酸、甘油三酯等。
因此，本实验用乙醇、***为溶剂，***为沉淀剂，干燥后获得卵磷脂。新提取得到的卵磷脂为白色蜡状物，与空气接触后因所含不饱和脂酸被氧化而呈黄褐色。卵磷脂中的胆碱，在碱性溶液中可分解为三甲***，而具有特异的鱼腥味，可用于鉴定。
二、实验原理（一）卵磷脂的提取和纯化
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物质提取、纯化受到多种因素的影响，如抽提物的种类及其配比、抽提条件（温度、时间等）都能影响提取的结果。这种多因素的试验可以通过正交法，即用一特制的表格—正交表来安排试验，计算和分析试验结果。这样就能通过少量试验取得较好的效果。
本实验运用正交法抽提物的种类及其配比、时间温度和料液比这4个因素对卵磷脂提取和纯化的影响，并求得在什么样的条件下可以达到最佳的试验效果。
正交法实验设计
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水平
影响因素
[乙醇]∶ [***]
温度
时间（min）
料液比
1
5∶1
4℃
10
1∶4
2
4∶1
25℃
20
1∶5
3
3∶1
60℃
30
1∶6
表1 抽提物、温度、时间和料液比4因素3水平
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表3 L9 表
按一般方法，如对4个因素3个水平的各种搭配都要考虑，共需做3*3*3*3=81次试验，而用正交表只需做9次试验，即选用L9表(L是正交表的代号，下标数字表示试验次数)。
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试验号
影响因素
试验结果
[乙醇]∶ [***]
温度
时间（min）
料液比
1
1 5∶1
1 4℃
1 10
1 1∶4
2
1 5∶1
2 25℃
2 20
2 1∶5
3
1 5∶1
3 60℃
3 30
3 1∶6
4
2 4∶1
1 4℃
2 20
3 1∶6
5
2 4∶1
2 25℃
3 30
1 1∶4
6
2 4∶1
3 60℃
1 10
2 1∶5
7
3 3∶1
1 4℃
3 30
2 1∶5
8
3 3∶1
2 25℃
1 10
3 1∶6
9
3 3∶1
3 60℃
2 20
1 1∶4
I （I水平试验结果总合）
II （II水平试验结果总合）
III（III水平试验结果总合）
I/3
II/3
III/3
级差
表4 试验安排
将本试验的4个因素依次放在L9表的第1，2，3，4列，再将各列的水平数用该列因素相应的水平写出来，就得到上表的试验安排。
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（二）薄层层析
薄层层析（TLC）是一种微量而快速的层析方法。其层析是在吸附剂（固相支持物）均匀涂布的的薄层上进行的，故称薄层层析。而待分析的样品，是点加到薄层板的一端，然后将该端浸入适宜的展层剂中，在密闭的层析缸中展层。
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由于各种物质的结构和性质的不同，其在吸附剂表面的吸附能力各异。吸附力大的易被吸附剂吸附，而较难被展层剂所解吸。吸附力小的则不易被吸附剂吸附，而易被展层剂携带至较远的距离。这样，各种物质在吸附剂和展层剂之间反复多次的被吸附与解吸附，就表现出不同的迁移率而得以分离，并可以通过与显色剂的显色反应而得到鉴定与区分。
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