文档介绍：中国海洋大学
硕士学位论文
栉孔扇贝急性病毒性坏死病毒垂直传播途径的研究
姓名:于佐安
申请学位级别:硕士
专业:水生生物
指导教师:王崇明;李赟
20080601
栉孔扇贝急性病毒性坏死病毒垂直传播途径的研究摘要摘要:栉孔扇贝“急性病毒性坏死病毒”煌财廷已被证实为是一种对养殖栉孔扇贝危害极大的病原体,开展其垂直传播途径的探索对于养殖生产中的该疾病的预防与控制、健康养殖模式的建立和健康苗种的培育具有重要的理论和实践意义。鉴于目前栉孔扇贝苗种主要来源于养殖海区半人工采苗的野生苗,仅凭栉孔扇贝繁殖季节对产卵场的调查检测,难以辨别亲贝、卵、幼体、稚贝的一一对应关系。于是,本文通过室内人工育苗的方法人为控制亲本和下一代的对应关系,同时,应用建立的间接酶联免疫吸附法对通过室内人工育苗得到的样品和贝类人工育苗场收集的样品进行大批量的定性检测,应用电镜技术和间接免疫荧光技术对栉孔扇贝的亲贝卵巢、卵、受精卵和发育各期的幼体进行定位检测,从这两方面验证该病毒是否存在垂直传播途径。年月和年驴U沽个批次的室内人工育苗,将亲贝各放在一独立育苗水体内产卵、孵化,并进行幼体培育。从个独立育苗水体中,采获亲贝、卵各个家系样品,受精卵、斡壮妗⒖窍钣壮娓黾蚁笛罚眼点幼虫黾蚁笛贰月罩眨颖蠢嗳斯び绯∧诔晒Σ集到栉孔扇贝亲贝、卵、受精卵等各期幼体。利用已建立的间接ḿ觳馓逑担圆杉降蔫慰咨缺辞妆础卵和各期幼体进行检测,探讨其是否存在垂直传播的可能性。检测结果显示:亲贝家系样品的性腺中可以检测到病毒,而卵、受精卵、斡壮妗⒖嵌ビ壮妗⒀播途径的可能性不大。为了进一步证实间接ǖ募觳饨峁眉浣用庖哂ü饧际对攻毒后栉孔扇贝的亲贝卵巢进行检测。同时利用电镜技术对发病疫区的栉孔扇贝亲贝卵巢和室内人工育苗的亲贝卵巢以及各期幼体进行观察。结果发现:在栉点幼虫的家系样品中均未检测到病毒。由此可以判断,栉孔扇贝垂直传
孔扇贝的生殖腺内发现了病毒,但是病毒的感染部位主要分布在生殖腺小管的外膜中,而卵原细胞是由生殖小管的内生殖上皮产生的。由此可以判断,病毒粒子并不能感染卵细胞。而且在扇贝的各期幼体电镜超薄切片中也未发现病毒。这三种不同的检测技术的检测结果可以证明:可以感染宿主生殖腺结缔组织的间质细胞,但不能通过生殖活动感染卵细胞,由此推断不存在垂直传播途径的可能性。关键词:栉孔扇贝,病毒,间接电子显微镜
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书、支弋学位论文作者签名:寸位安签字日期:助衲暾荚拢珼日签字日期:月学位论文作者签名:寸伍安签字日期:厶。器年码尤学位论文版权使用授权书独创声明垫逡直墓焦鲞要挂别座塑鲍关ㄖ或其他教育机构的学位或证书使本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含未获得用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。本人授权学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》,并通过网络向社会公众提供信息服务。C艿难宦畚脑诮饷芎笫视帽臼谌ㄊ导师签字:
—,.俗名干贝蛤浔湛羌≈瞥、海扇,属≡娜范软体动物门、瓣腮纲⒄渲楸茨、孔扇贝人工育苗和养殖技术研究获得成功。年代以来,随着栉孔扇贝半人工采苗技术的不断完善和海湾扇贝引种的成功以及养殖技术的日趋成熟,我国的扇贝养殖业取得了长足的发展,养殖面积和产量大幅度提高。在北方沿海逐渐形成了以栉孔扇贝和海湾扇贝为主导产品的近海贝类养殖业,为沿但是,随着养殖规模不断扩大和养殖密度的不断增加,自年以来,在北方养殖海区,已连续几年发生了栉孔扇贝大规模死亡劳雎矢叽%以上夜缺囱骋翟斐闪酥卮笏鹗Вù蟮刈璋苏庖桓咝Р业的持续发展,甚至直接威胁到现有产业的生存踉颂蔚龋。自年起,通过流行病学、组织病理学、病原学以及环境理化、生物因子等方面的深入研究,经过全面的调查与排查,现在已经证实:一种球形病毒是导致栉孔扇贝大规模死亡的直接病原P碌龋。并把由该病毒引起的栉孔扇贝“大规模死亡症”定名为“急性病毒性坏死症Ⅵ自我国北方海区栉孔扇贝在养成期开始大规模死亡以来,有关科研人员至少涉及到寄生原生动物、原核类微生物、细菌、病毒、以及环境因子等几个方面。于瑞海等等认为养殖密度过大、苗