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DAPI染DNA的原理及使用方法.doc

上传人:xiang1982071 2021/2/20 文件大小:284 KB

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文档介绍

文档介绍:DAPI染DNA的原理及使用方法
DAPI 即4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole),分子式为C16H15N5·2C3H6O3 ,。
DAPI是一种能够与DNA强力结合的荧光染料。它结合到双链DNA小沟的AT碱基对处,一个DAPI分子可以占据三个碱基对的位置。结合到双链DNA上DAPI分子的荧光强度提高大约20倍,常用与荧光显微镜观测,根据荧光的强度可以确定DNA的量。另外,因为DAPI可以透过完整的细胞膜,它可以用于活细胞和固定细胞的染色。
在荧光显微镜观察下,DAPI染剂是利用紫外光波长的光线激发。单独DAPI的最大吸收波长为340nm,最大发射波长为488nm;当DAPI与双链DNA结合时,最大吸收波长为364nm,最大发射波长为454nm(10 mM Tris ,100 mM NaCl,10 mM EDTA),其发散光的波长范围含盖了蓝色至青绿色。DAPI也可以和RNA结合,但产生的荧光强度只有与DNA结合的荧光强度的1/5,其发散光的波长范围约在500nm左右。
DAPI的配制及贮存
固体粉末:避光,2-8 ℃保存,3年没有问题。
贮存液:用无菌水配制成浓度1 mg/ml的贮存液,配好后用锡纸包起来,避光,可在-20 ℃下长期保存。(DAPI易溶于水,在PBS中溶解度不高)
使用浓度:贮存液用1xPBS稀释到终浓度100 ng/ml。
荧光封片液: mol/L碳酸盐缓冲液与甘油等体积混合,
染色与观察:制好的玻片上滴加几滴DAPI染液,染色10分钟,流水冲去染液,滤纸吸除多余水分,加一滴荧光封片液,置于荧光显微镜下观察,激发波长360-400nm。
注意事项:DAPI可能具有致癌性,全部操作过程中必须带塑料或乳胶手套。
推荐厂商:Invitrogen,Sigma
资料下载:点击下载
结构式:
DAPI结构式
DAPI与DNA的复合物晶体结构
以下英文介绍摘自Wikipedia。
DAPI or 4',6-diamidino-2-phenylindole is a fluorescent stain that binds strongly to DNA. It is used extensively in fluorescence microscopy. Since DAPI will pass through an intact cell membrane, it may be used to stain both live and fixed cells.
For fluorescence microscopy, DAPI is excited with ultraviolet light. When bound to double-stranded DNA its absorption maximum is at 358 nm and its emission maximum is at 461 nm. (This emission is fairly broad, and appears blue/cyan.) DAPI will also bind to RNA, though it