文档介绍：实验一 质粒DNA的提取及检测
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质 粒（plasmid）
是染色体外小型（1-200kb）的共价、闭合、环状的双链DNA分子（cccDNA），能自主复制并能稳定遗传的遗传因子。
常常编码一些对宿主有利的酶的基因，这些基因的表型包括抗生素抗性、产生抗生素、限制酶、修饰酶等
质粒的复制：严紧型复制（1~n个）
松弛型复制（20个以上）
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常用的质粒载体
是通过DNA重组技术构建而成的。pUC18, pUC19
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质粒提取的思路
质粒的特性：共价、闭合、环状的小分子量DNA
要去除的物质：
蛋白
基因组DNA
脂类及小分子杂质
RNA
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第一部分 质粒DNA的提取
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一．目的
了解提取质粒的原理。
学****和掌握质粒提取的方法和技术。
细菌的生长和质粒的扩增
菌体的收集裂解及质粒DNA的分离
质粒DNA的纯化
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二．原理
碱变性法提取主要是利用共价闭合环状质粒与线性染色质在拓扑学上的差异：
在pH -，线性的大分子量细菌染色体DNA变性，而共价闭环质粒DNA仍为自然状态；
将pH调至中性并有高浓度盐存在的条件下，染色体DNA之间交联形成不溶性网状结构，大部分DNA和蛋白质在去污剂SDS的作用下形成沉淀，而质粒DNA仍为可溶状态。通过离心可除去大部分细胞碎片、染色体DNA、RNA及蛋白质，质粒DNA尚在上清中，再用酚***仿抽提进一步纯化质粒DNA（可省略）。
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三、实验仪器、材料与试剂
（一）仪器：恒温摇床、台式离心机、高压灭菌锅
（二）材料：含pUC18（或其他）质粒的大肠杆菌、
（三）试剂：
LB培养基（液体、固体）
溶液I
溶液II
溶液III
TE()
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溶液 I
50 mmol/L 葡萄糖/1mg/mL溶菌酶
25 mmol/L Tris·Cl ()
10 mmol/L EDTA ()
在10 lbf/in2(×104Pa)高压下蒸汽灭菌15分钟，保存于4℃。
作用：裂解细胞，鳌合金属离子使金属酶失活
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