文档介绍：临床药理研究所
细胞分离与培养技术
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现代生物技术
基因工程技术
细胞工程技术
酶工程技术
发酵工程技术
细胞培养
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细胞分离技术
从血液、体液中分离细胞
从原代组织中分离细胞
从原培养容器中分离细胞 -- 传代培养
原代培养
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细胞分离技术--从血液、体液中分离细胞
采血方法：
人 静脉穿刺、耳垂或手指针刺采血；
小动物（大鼠、小鼠） 剪尾法、眼眶采血、心脏穿刺法、断颈取血或股动脉放血。
兔 耳静脉或动脉穿刺取血。
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细胞分离技术--从血液、体液中分离细胞
血液抗凝方法：
肝素法：-（即5%肝素溶液2-4µl）；
草酸盐法：，，加双蒸水10ml溶解后，，使其干燥。若采用5ml以下的血液可直接注入此试管中，轻轻摇晃；
枸橼酸钠法：先配制2%枸橼酸钠，-；
EDTA法（）： EDTA 2µl。
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细胞分离技术--从血液、体液中分离细胞
体液标本采集：
在局部70%酒精消毒灭菌后，用灭菌注射器穿刺入体腔（如胸腔，腹腔，关节腔等）抽取液体样品。
膝关节腔穿刺
胸腔穿刺
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细胞分离技术--从血液、体液中分离细胞
血样中红细胞和白细胞的分离：
利用细胞的相对密度或大小不同而沉降速度不同的原理，以自然沉降法结合不同速度的离心沉降法将不同的细胞分离。
抗凝血，室温或37℃下直立静置30-60min，红细胞沉降至下层，中间乳白色薄膜层为白细胞及血小板，上层为淡黄色血浆。也可将抗凝血与3%明胶（经灭菌消毒）等量或3︰l量混合于离心管中，直立静置30-60min，红细胞沉于管底，上层乳白色混浊液含白细胞。
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细胞分离技术--从血液、体液中分离细胞
血中单个核细胞的分离：
单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞，-，采用速度沉降法原理使其分离。
淋巴细胞分离液
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细胞分离技术--从血液、体液中分离细胞
血中单核细胞的分离：
利用细胞在培养过程中贴壁时间的早晚不同进行细胞分离
单个核细胞悬液
多将悬液放入12cm直径的培养皿中，于37℃培养箱中静置30-60min。此时单核细胞贴壁，而淋巴细胞尚未贴壁，倾出未贴壁细胞，并用Hanks液轻轻冲洗培养皿以尽量洗下未贴壁细胞（淋巴细胞）。
用Hanks液强力冲洗吹打与震荡，将贴壁的单核细胞冲落或用刮刀轻刮，收集贴壁的单核细胞。
计数后分别制备所需浓度的细胞悬液。
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细胞分离技术--从血液、体液中分离细胞
黏附法分离血中单核细胞、T，B淋巴细胞
因B淋巴细胞和单核细胞能黏附于尼龙纤维柱上（聚酰胺纤维柱），所以可将其与T淋巴细胞分离。
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