文档介绍：
内容
一、色谱技术回顾
二、高效液相色谱法及色谱基本语言
三、培训设备
四、溶剂准备
五、LC3000色谱仪组成
六、LC3000系统基本操作
七、HPLC维护知识

分离结果
流动相
固定相
起源
Tewett 1903
色谱技术回顾

色谱技术回顾
色谱法的原理
图形化解释色谱法
100米短跑
8位选手位于起跑线上开始：(样品溶液在进样阀))
跑道阻力,空气阻力：（色谱柱）
肌肉动力:（输液泵）
拍照和终点线： (检测器)
秒表：（工作站)

色谱分离的机理
★★色谱分离是一个物理的过程
流动相（Mobile Phase）
固定相（Stationary Phase）
样品（溶解于流动相中的溶质）
色谱技术回顾

色谱技术回顾
色谱法是什么？
色谱法是利用不同性质的物质在不相混溶的两相中分配系数，吸附解吸附或其它性能不同而被分离。

色谱技术回顾
常规分类方法
按流动相的物态分:
–气相色谱(Gas Chromatography, GC)
用气体作为流动相(又叫载气)
–液相色谱(Liquid Chromatography, LC)
用液体作为流动相(又叫洗脱剂)
-超临界流体色谱
（是指使用条件，超过了流动相的临界温度和压力，以CO2为代表）
按固定相的形态分:
–平面色谱
􀂃纸色谱
􀂃薄层色谱
–柱色谱
按流动相和固定相的相对极性分:
–正相色谱(Normal Phase Chromatography)
􀂃固定相的极性大于流动相
–反相色谱(Reversed Phase Chromatography)
􀂃固定相的极性小于流动相
反相色谱最常用的流动相及其洗脱强度：
水< 甲醇<乙***< 乙醇<丙醇<异丙醇<四氢呋喃
最常用的流动相组成“甲醇-水；乙***-水”
正相色谱最常用的流动相及其洗脱强度：
正己烷<***<乙酸乙酯<异丙醇
**应用添加剂，成为离子对、离子抑制方法

色谱技术回顾
按分离过程的机理分:
–吸附色谱(Absorption Chromatography)
􀂃根据样品组分对活性固定相表面吸附亲和力的不同实现分离
–分配色谱(Partition Chromatography)
􀂃分离基于样品组分在固定相和流动相中的溶解度(分配系数)不同
–离子交换色谱(Ion ExchangeChromatography)
􀂃根据样品组份离子交换亲和力的差异分离,简称离子色谱(IC)
–体积排除色谱(Size Exclusion Chromatography)
􀂃GPC(Gel PermeationChromatography)凝胶渗透色谱法
–固定相是疏水性凝胶,流动相是有机溶剂
􀂃GFC(Gel Filtration Chromatography)凝胶过滤色谱法
–固定相是亲水性凝胶,流动相是水溶液

什么是高效液相色谱
High Performance Liquid Chromatography
高效液相色谱法，简称：HPLC
是一种区别于经典液相色谱；基于仪器方法的高效能分离手段：
高性能的色谱柱，高精度、耐高压的输液泵以及高灵敏度的检测器……
广泛应用于各个领域：
医药 / 环保 / 石化 / 生命科学 / 食品及农业……
二、高效液相色谱

高效液相色谱法
柱色谱法
色谱柱长度（cm）
10～25
10～200
固定相粒度：粒度（um）
筛孔（目）
5～50
2500～300
75～600
200～30
色谱柱入口压力（MPa）
2～20
～
色谱柱柱效（理论塔板数/米）
2000～50000
2～50
分析时间（h）
～
1～20
与经典液相色谱（柱色谱）比较
高效液相色谱

发展
高效液相色谱
分析
定性
定量
确定样品中化合物
制备
提取
分离
纯化
混合物中有价值的化合物
液相色谱仪的两大主要用途
高效液相色谱