文档介绍：河北农业大学
博士学位论文
鸭梨多酚氧化酶基因克隆及其反义转化的研究
姓名:李桂琴
申请学位级别:博士
专业:果树学
指导教师:张玉星
20091101
在梨果实生产和加工过程中,多酚氧化酶在引发了果实的迅速褐变,给果品的外观品质和加工性能带来了严重的影响,己经成为困扰我国梨果品生产和经营的主要难题之一,生产上急需对其进行性状改良。本研究以降低原产我国梨品种——鸭梨果实组织内多酚氧化酶含量为目标,围绕着多酚氧化酶基因开展了基因克隆、序列分析、反义表达载体构建以及遗传转化等一系列研究,最终获得了低多酚氧化酶活性的转基因鸭梨植株,从而为从根本上解决梨果实褐变问题、培育抗褐变梨新品种奠定了基础。所取得的主要成果如下所示:荻喾友趸富虮J匦蛄猩杓埔欢砸铮匝祭婀礶D0謇┰龅到的鸭梨多酚氧化酶基因片段,并以此序列为基础扩增该基因全长,得到了长度的的鸭梨多酚氧化酶基因全长序列,进一步根据得到的序列开放性读码框设计引物扩增得到鸭梨多酚氧化酶基因列,结果显示该基因序列和蛄屑罨槌晌薏钜欤な笛祭娑喾友趸匝祭娑喾友趸富蛩氚被嵝蛄薪猩镄畔⒀Х治觯峁砻鞲冒基酸序列与其它物种多酚氧化酶高度同源,且包含一个由霭被岵谢槌傻睦氨酸酶超级家族保守结构域,具有一个酪氨酸酶岷衔坏愫鸵桓隼野彼酑结合位点,证实鸭梨多酚氧化酶属酪氨酸酶超级家族成员,:该蛋白的疏水性氨基酸位于分子内部,亲水性氨基酸位于分子表面,具有可溶性亲水蛋白的典型特征,不具备跨膜结构,故推测鸭梨多酚氧化酶在细胞中的定位应该位于类囊体腔中。.;,,平均苗高蛔罴焉嘌浞轿/蔗糖疞/屎推骄直鹞ズ.。状喂菇搜祭娑喾友趸富虻姆匆灞泶镌靥濉8菟寺〉降难祭娑喾友化酶基因序列,选择序列片段,与切除虻恼婧吮泶镌靥錺反向连接后,电转仪法转化农杆菌,经酶切和ㄖな担祭娑喾友化酶基因反义表达载体构建成功,并已整合到农杆菌上。状斡呕⒘搜祭娴囊糯;逑怠T谘祭嬉镀偕逑档幕∩隙杂跋炫杆菌介导遗传转化的各方面因素进行优化,结果显示,当叶盘预培养欤└司液浓度、侵染、共培养焓背鲇屎妥;首罡撸俗橹盏摘要琍拇罅看基因组成上不具备内含子。魑8ㄒ蜃印
关键词:鸭梨;多酚氧化酶碊换蚩寺。簧镄畔⒀Х治觯环匆錜技培养基中添加痬聂溶星嗝顾匾种撇杏嗯└司Ч詈谩状位竦镁哂蟹匆宥喾友趸富虻难祭孀;蛑仓辍Sτ糜呕囊糯;系对鸭梨组培苗进行多酚氧化酶基因反义表达载体的遗传转化,共获得卡那霉素抗性苗辏璓鉴定证实其中曜榕嗝缰型庠椿蚴迪殖晒ψ;欢曰竦玫淖;因鸭梨苗进行生根和田间移栽,经杂交和多酚氧化酶活性检测证实,转基因鸭梨植株体内多酚氧化酶基因转录和翻译水平均得到了明显的抑制。术;遗传转化
.齦,—琾.,,琣‘’篜琲甀甊:瑃..,,.甈甃::
甌,籅.—甒.;/./%//琲/琲,,’瓵痬瑃..—,.琤琋篩;籊
⋯⋯躲弼学位论文作者签名:圣谤芋签字恚骸凵’年窍鏡签字同期:矽口辏月ν万岳办学位论文版权使用授权书独创性声明发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得塑兰垦盎些盘堂或其他教育机构的学以伊卵年本学位论文作者完全了解塑皇垦盔些盘鲎有关保留、使用学位论文的规定,阅。本人授权塑皇垦盎些盘堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。C艿难宦畚脑诮饷芎笫视帽臼谌ㄊ工作单位:通讯地址:中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者毕业后去向:导师签名:签字日期:电话:邮编:月,
第一章鸭梨多酚氧化酶基因克隆及其分析褐变是果蔬等农产品中普遍存在的一种有害现象,它的发生不仅对农产品的外观、风味、营养和加工性能产生不利影响,而且还大大降低了耐贮性,给果蔬产品常规运输、贮藏和销售带来了一系列困