文档介绍：甘肃农业大学
硕士学位论文
氧化酶反义基因植物表达载体的构建及其转化甜瓜品种
‘GT-1’的研究
姓名:黄永红
申请学位级别:硕士
专业:果树学
指导教师:赵长增;陆璐
20050601
二摘要在世界园艺业中占有重要地位,种植面积和产量在十大水果中居第唬泄鸸现种裁婊筒烤邮澜绲谝弧S捎诖罅刻鸸显月份成熟,形成明显上市高峰期,此期正值高温季节,甜瓜在贮藏、运输过程中,极易软化、腐乙烯在高等植物的生长、发育、成熟、衰老过程中起着重要作用,乙烯的产生与果实的软化、腐烂有密切关系。年,蚘髁艘蚁┑纳锖铣赏揪叮果实铣擅负虯氧化酶基因的表达,进而减少乙烯的生成量,就可以延缓果实的后熟过程,延长果实的贮藏期。大多数甜瓜属于呼吸跃变型果实,传统的贮藏保鲜措施如冷藏,气调贮减,只能提供一个良好的贮藏环境,减少贮藏环境中乙烯的存在,但难以从根本上解决果实采后软化问题。本研究拟通过反义际趸竦米7义趸富蛱鸸现仓辏云诨竦媚椭氐奶鸸闲轮种省本项目主要从两个方面进行了研究,一是甜瓜趸阜匆寤蛑参锉泶镌体的构建并转化普通烟草;另一个是甜瓜高效遗传转化体系的建立及用趸反义基因转化一个甜瓜栽培品种‘’,获得了转基因植株。因,将其连接在受体质粒靥迳希菇ǔ珊蠫基因的甜瓜氧化酶反义基因植物表达载体產。采用直接转化法将產导入根癌农杆菌菌株,并用新构建的工程菌对普通烟草进行了遗传转化。在≡裱沽ο禄竦玫难滩葑;欢ㄑ亢屯暾仓辏齡基因组织化学法阶段用该反义基因转化甜瓜品种以改良甜瓜果实耐贮运性打下可靠基础。以甜瓜品种‘’的幼龄子叶作为根癌农杆菌介导转化的外植体,通过对基因表达的分析,研究此转化体系的最佳实验参数。实验结果表明,预培养时间、预培养后对外植体进行再刨处理、感染时间、共培养时间、农杆菌工程菌的浓度等对转化效率都有一定的影响;但是根癌农市盏嘉顰⒉荒艽蠓忍岣咦;ЧT培养,对外植体进行伤俅创恚肙呐└司こ叹腥,在上述研究的基础上,以甜瓜‘’的幼龄子叶作为根癌农杆菌介导转化的外植体,将子叶预培养后,对外植体进行伤口再刨处理,用牡呐└司工程菌產/%。:笃烂,给瓜农造成巨大经济损失,也影响了我国甜瓜产业的发展。证明了铣擅负虯氧化酶是植物体内乙烯合成中的两个限速酶。降低跃变型用限制性内切酶从目的基因供体质粒猘上切下大小约的目的基检测以及椒ḿǎな盗烁梅匆寤蛞训既胙滩莼蜃橹小4讼钛芯课O乱共培养拇恚琯基因表达率达到最高。甜瓜/摘要届嗯┮荡笱妒柯畚
色反应,说明蛟诘鞍字仕缴系玫搅吮泶铩S捎谠趐载体上趸福%。对选择诱导出的不定芽和再生植株叶片进行染色,均有蓝甜瓜趸阜匆寤蚝蚲基因是顺序串连排列,因此可以判断,甜瓜化酶反义基因已经转入抗性再生植株中。关键词:植物表达载体;转化甜瓜;反义基因;摘要属引肃农业人学硕郝哿
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第一章:文献综述甜瓜是一种雅俗共赏的佳果,既有大众化品种,也有高档产品。腐烂。迅速失去商品价值,给生产者和经营者带来很大的经济损失。最传统的是使用直接威胁着人们的健康,化学药剂对人体的药害已越来越受到社会的关注锸狼宓工作者和食品保鲜者进行长期的、卓有成效的工作。然而,虽然通过低温和气调方式存规模难以放大等缺点难以被普遍采用。而通过常规育种来培育耐贮运品种,总有局近代分子生物学研究表明,包括果实成熟在内的一切发育过程都受控于基因表达,果蔬采后研究工作中最活跃的领域之一Ρ堑。乙烯是五大植物激素之一,植物对它非常敏感,空气中低达/囊蚁┚湍它含糖量高ィ踔ヒ陨希欢鞴虾橇吭%~%桓挥信ㄓ粲人的芳香;矿物质啤⒘住⑻和维生素含量丰富。它不仅能鲜食,还可以加工成甜瓜汁、甜瓜干、甜瓜罐头等,此外,甜瓜含有胨化酶,可以把不溶性蛋白质转化为可溶性蛋白质,对肾脏病人颇有好处。祖国医学很早就有甜瓜可助治疗肾脏病、胃病、贫血、咳嗽、便泌及排除结石的记载淼挛暗。根据联合国粮农组织钚峦臣疲谌澜绱笞谒呐琶校鸸暇佑第九位,是全世界普遍栽培的、经济价值很高的重要园艺作物蹙钡。然而,由于甜瓜的产期集中,且正值高温季节,使得它在贮藏、运输过程中,极易软化、化学药剂处理解决甜瓜贮运过程中软化、腐烂、保鲜问题。虽然化学杀菌剂可