文档介绍：什么是 酶联免疫分析技术
ELISA的基本原理和方法
ELISA的种类和变化
ELISA的特点
ELISA的应用实例
1971年瑞典学者Engvail和Perlmann,荷兰学者Van Weerman和Schuurs分别报道将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定方法，即酶联免疫吸附测定法 (enzyme-linked immunosorbent assay , ELISA) 。ELISA现在已成为目前分析化学领域中的前沿课题 ，它是一种特殊的试剂分析方法，是在免疫酶技术( immunoenzymatic techniques ) 的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术 。
一、基本原理
它采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。测定的对象可以是抗体也可以是抗原。
在这种测定方法中有3种必要的试剂：
①固相的抗原或抗体（免疫吸附剂）
②酶标记的抗原或抗体（标记物）
③酶作用的底物（显色剂）
测量时，抗原（抗体）先结合在固相载体上，但仍保留其免疫活性，然后加一种抗体（抗原）与酶结合成的偶联物（标记物），此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性，当偶联物与固相载体上的抗原（抗体）反应结合后，
再加上酶的相应底物，即起催化水解或氧化还原反应而呈颜色。
其所生成的颜色深浅与欲测的抗原（抗体）含量成正比。
这种有色产物可用肉眼、光学显微镜、电子显微镜观察，也可以用分光光度计（酶标仪）加以测定。
其方法简单，方便讯速，特异性强。
二、酶及其底物
酶结合物是酶与抗体或抗原, 半抗原在交联剂作用下联结的产物。是ELISA成败的关键试剂，它不仅具有抗体抗原特异的免疫反应，还具有酶促反应，显示出生物放大作用，但不同的酶选用不同的底物 ，将得到不同的颜色反应.
酶
底 物
显色反应
测定波长
辣根过氧化物酶
邻苯二胺 四甲替联苯胺 氨基水杨酸 邻联苯甲胺 2,2‘-连胺基-2(3-乙基-并噻唑啉磺酸-6)铵盐
橘红色 黄色 棕色 兰色 蓝绿色
492
460
449 425 642
碱性磷酸酯酶
4-硝基酚磷酸盐(PNP) 萘酚-AS-Mx磷酸盐+重氮盐
黄色 红色
400 500
葡萄糖氧化酶
ABTS+HRP+葡萄糖 葡萄糖+甲硫酚嗪+噻唑兰
黄色 深蓝色
405
420
β-Ｄ－半乳糖苷酶
甲基伞酮基半乳糖苷(4MuG) 硝基酚半乳糖苷(ONPG)
荧光 黄色
360,450 420
ELISA的种类和变化
（一）双抗体夹心法
（二）间接法
（三）竞争法
（四）双位点一步法
（五）捕获法测IgM抗体
（六）应用亲和素和生物素的ELISA
（一）双抗体夹心法
此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原
获得待分析物的未标定抗体
将特异性抗体与固相
载体连接形成固相抗体
洗涤除去未结合的
抗体及杂质
加入封闭蛋白溶液以封闭载体
表面残留的蛋白结合位点
洗涤并除去未结合的封闭蛋白
加受检标本（抗原）形成
固相抗体－抗原复合物
洗涤除去其他
未结合的物质
加酶标抗体生成
抗体—待测抗原—酶标记抗体
的复合物
彻底洗涤
未结合的
酶标抗体
加底物进行
酶催化反应
根据颜色反应的
程度进行该抗原
的定性或定量测定