文档介绍：又肄眚科鼻孳硕士学位论文论文题目:恶性胶质瘤在器官型脑片模型中的侵袭及抗侵袭研究一级学科:临床医学二级学科:外科学神经外科论文作者:任炳成指导教师:杨学军教授导师组成员:天津医科大学研究生院二。一三年五月’分类号:密级:学位类别:学校代码:学号:学:科门类:医学科学学位团专业学位口..
学位论文作者签名:础这口,在——年解密后适用本授权书。不保密囤。期:如·;年细学位论文原创性声明学位论文版权使用授权书期:≯,;年厂月罗日本人郑重声明:所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外,论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果,与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。日期:加荒辍拢本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文,并编入有关数据库。朐谙喽杂Φ姆娇蚰诖颉啊保密本论文属于学位论文作者签名:导师签名:
中文捅要胶质母细胞瘤是颅内常见恶性肿瘤,目前临床上采用手术、放疗、化疗、生物治疗等综合治疗,但仍存在高复发率、高致残率、高病死率等问题,因此,在对人恶性脑胶质瘤的治疗研究中,寻找一种更加有效的治疗方法成为一项刻不容缓的课题。近年发现了,羢,纫幌盗杏攵裥越褐瘤细胞侵袭迁移有关的蛋白,从而认识到与恶性胶质瘤细胞侵袭性相关的骨架构筑分子蛋白、运动调控蛋白的异常表达及活性,是导致肿瘤细胞向邻近脑实质侵袭、向远隔迁移的主要原因之一。因此,抑制胶质母细胞瘤的侵袭迁移,可以立足于控制胶质瘤细胞本身的运动相关蛋白。理解恶性胶质瘤细胞在脑实质内播散及运动相关蛋白在细胞运动中的作用是治疗恶性胶质瘤的关键。绿色荧光蛋白作为一种报告蛋白为我们提供了观察胶质瘤细胞运动的标记。三维胶质瘤细胞一脑片共培养模型为我们提供了胶质瘤细胞在体内运动的环境。通过培养于脑片的胶质瘤细胞,可以追踪观察胶质瘤细胞在脑片内的运动方式。是重要肌动蛋白骨架调控蛋白,控制板状伪足的形成。激活其下游效应因子,并和这些效应因子共同转运至细胞运动前端的细胞膜下,诱导肌动蛋白骨架重组,产生片状伪足,从而促进细胞运动。有关胶质瘤侵袭迁移的体外研究的传统方法己证实,蛋白的活性与胶质瘤细胞的侵袭性密切相关。我们通过胶质瘤细胞一脑片共培养模型来验证蛋白的活性与胶质瘤细胞侵课题分为二部分进行:⒔褐柿鱿赴荒云才嘌P汀NDD饨褐柿鱿赴谔迥诨肪持械基因的慢病毒感染大鼠胶质瘤细胞,人、、逯窒胞。利用流式细胞仪筛选并计数五种荧光细胞。为使细胞更好的接种于大鼠脑片机切取芰銼笫笕裕谱厚脑片并培养于迦胧较胞培养皿上。连续观察脑片的形态及结构欤饣旧ḿ云窬脑片共培养模型。荧光显微镜及共聚焦显微镜观察细胞在脑片上的侵袭和迁袭性的关系。运动,我们建立了胶质瘤细胞一脑片共培养模型。首先,利用携带绿色荧光蛋白片表面,将筛选后的荧光细胞分别培养成绿色荧光细胞球。第二,利用振动切元活性。最后,将绿色荧光细胞细胞球接种于脑片表面,
...。结果:利用倒置荧光显微镜观察,纸褐柿鱿赴晒ψH肼躺ü獾鞍祝利用流式细胞仪筛选出荧光细胞,荧光细胞比例为ィ焕寐僖〈卜ㄅ嘌荧光细胞球,将筛选后的荧光细胞分别培养成大小约¨南赴颍籗大鼠完整全脑脑片可在体外培养成活;利用倒置显微镜观察,大鼠脑片连续培笕匀槐3滞暾钠ぶ省⑽沧春恕㈦蓦仗宓茸橹峁梗琍旧な的云神经元仍保持活性;利用共聚焦激光扫描显微镜逐层扫描可见细胞在脑片中的侵袭及三维分布,侵袭过程中细胞形态保持良好。褐柿鱿赴谄鞴傩湍云P椭械那窒翱骨窒芯俊NA似拦澜褐柿细胞在脑片上的迁移距离,通过倒置荧光显微镜我们测量了细胞不同时间在脑片上的迁移面积,利用同心圆的形式记录了迁移直径,计算出胶质瘤的迁移速率。胶质瘤细胞一脑片共培养旌螅%多聚甲醛固定,通过共聚焦显微镜逐层扫描分析胶质瘤细胞在脑片内的侵袭深度。抑制剂在脑片上对胶质瘤细胞运动的影响。实验中分二组:处理组:将荧光细胞球接种于脑片表面,于温箱、、饱和湿度条件下培养∈焙螅/的滴入到荧光细胞球接种点,连续加入七天;对照组:将荧光细胞球接种于脑片表面,于温箱、、饱和湿度条件下培养∈焙螅梦⒘考右浩鹘玪荧光细胞球接种点,连续加入七天。旌螅%多聚甲醛固定,共聚焦显微镜扫描成像评价不同处理组细胞迁移和侵袭能力的差别。活性实验和分别检测不同处理组细胞中甊⒆躌鞍椎谋泶水平。结果:荧光显微镜下观察显示细胞接种脑片表面后、天,