文档介绍：天津医科大学
硕士学位论文
胶质瘤中Rac1蛋白表达和其在恶性胶质瘤侵袭中作用的研究
姓名:张斌
申请学位级别:硕士
专业:临床医学;外科学神外
指导教师:杨学军
2012-05
中文摘要恶性胶质瘤是中枢神经系统最常见的肿瘤,约占成人颅内肿瘤的%%。近年来,尽管恶性胶质瘤的治疗己得到了值得关注的发展,但是恶性胶质瘤病人的预后并没有得到明显改善,胶质母细胞瘤患者的中位生存时间仍不足个月⋯。恶性胶质瘤分化程度差、缺乏凋亡、富含血管、增殖活性高和呈侵袭性生长。其中侵袭性生长是恶性胶质瘤最突出的生物学行为之一,也是导致肿瘤复发、远隔迁移和难以治愈的主要原因】。小部分具有极强迁移和侵袭能力的肿瘤细胞早期即向肿瘤周围及正常脑组织浸润,在远离原发灶处形成大量的微肿瘤,从而免于手术切除和放射暴露【俊Q芯咳衔U庑┫赴词悄灾琢龈上赴鸋恶性胶质瘤的侵袭迁移是肿瘤细胞与宿主细胞及细胞外基质相互作用的复杂过程。肿瘤细胞的侵袭过程一般可分为三个步骤,首先在黏附分子的介导下粘附于细胞外基质辉诨式鹗舻鞍酌茸饔孟陆到釫;通过旁分泌和自分泌的一些因子下细胞肌动蛋白骨架发生重组,形成伪足迁移运动【。其中,细胞的迁移运动是其关键环节。细胞的迁移运动由多种信号分子调控,其中肌动蛋白骨架及其调控蛋白最为重要【俊5毕赴硕保《癆骨架发生动态重组形成片状伪足,为细胞运动提供必要的力量【。是重要肌动蛋白骨架调控蛋白,控制板状伪足的形成。激活其下游效应因子,并和这些效应因子共同转运至细胞运动前端的细胞膜下,诱导肌动蛋白骨架重组,产生片状伪足,从而促进细胞运动。目前已经发现在乳腺癌、结肠癌及卵巢癌中表达均明显增高,且其高表达与肿瘤的侵袭转移密切相关【俊本课题主要讨论在胶质瘤组织中的表达及分布特点;对胶质瘤细胞迁移和侵袭的调节;以及其阳性细胞与胶质瘤干细胞的联系,在脑胶质瘤干细胞迁移和侵袭中的作用,分为以下三个部分:甊诮褐柿鲋械谋泶锛捌浞植继卣鳌NL教纸褐柿鱿赴那ㄒ品绞郊的表达与胶质瘤病理分级的相关性,我们收集年轮羖月新诊断的例人脑胶质瘤标本,每份标本通过术中导航精确的选取了肿瘤中心组织、肿瘤和水肿交界区组织,进行免疫组织化学染色和分析。结果发现正常对照脑组织中不表达或呈低表达,⑾郑琑诓同病理级别胶质瘤中的表达差异有统计学意义,.,的表天津医科大学硕士学位论文
达与胶质瘤的分级呈正相关,,胶质母细胞瘤实体区、肿瘤与脑组织交界区均有阳性细胞染色。在胶质母细胞瘤交界区阳性细胞在血管周围呈放射状和平行于白质纤维束分布。ü匾性的活性抑制剂下调的活性,探讨在基质细胞衍生因子,盏嫉娜硕裥越褐柿鱿赴ㄒ坪颓窒械作用。取细胞分为三组,预处理组:无血清培养基培养∈后,于无血清培养基中加入张ǘ任疞ご螅给予/,于无血清培养基中加入娲鶱跤螅鑃./欢哉兆椋何扪G迮嘌嘌小时,:倒置相差显微镜下观察各组细胞的形态变化:细胞迁移实验和赴窒笛槠兰鄄煌碜閁赴ㄒ坪颓窒芰Φ牟畋穑籖活性实验和分别检测不同处理组细胞中甊⒆躌蛋白及其下游蛋白的表达水平;免疫荧光法检测不同处理组细胞中伪足形成、的表达及其细胞内定位。结果:对照组比较,/激细胞伸出巨大的片状伪足;处理组细胞迁移和侵袭能力明显强于对照组对细胞内活化有明显的刺激作用.⑶细胞运动前端的胞膜下可见蛋白聚集。抑制剂/对诱导的片状伪足形成有显著的抑制作用;,。三组中总蛋白的表达水平没有明显变化甊粜韵赴虢褐柿龈上赴墓叵导癛谀越褐柿龈上赴ㄒ坪侵袭中的作用。免疫荧光双染色检测胶质瘤组织中阳性细胞与胶质瘤干细胞的关系。为进一步确定阳性细胞与胶质瘤干细胞的关系及在脑胶质瘤干细胞迁移和侵袭中的作用,我们通过免疫磁珠分选法分离胶质瘤干细胞,质瘤干细胞的活性;.
关键词:胶质瘤胶质瘤干细胞侵袭迁移移和侵袭能力;活性实验检测细胞中活性;检测细胞中蚆鞍椎谋泶锼健=峁好庖哂ü馑旧允敬蟛糠諫也呈阳性。成功培养出悬浮生长的细胞球,可以连续传代并持续表达神经干细胞标志物活性检测显示::与对照组比较,,细胞迁移和侵袭的能力明显强于幌赴;与对照组比较,:与对照组比较,处理组蚆鞍妆泶锼平明显降低,:甊诙哉漳宰橹胁槐泶铮诓煌侗鸾褐柿鲋芯斜泶铮