文档介绍：Polymerase Chain Reaction聚合酶链反应（PCR）
Polymerase chain reaction又称无细胞分子克隆系统或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增法，在模板DNA，引物（模板两端的已知序列）和四种脱氧核苷酸存在的情况下，DNA聚合酶依赖的酶促合成反应。
PCR的定义
PCR技术是由Cetus公司和加利福利亚大学1985年联合创造的，主要贡献者为Kary B mulis和HeneryA、Erlich。可将极微量的靶DNA特异地扩增上百万倍，能检测每10万个细胞中仅含一个靶DNA分子的样品。因而发明人Kary B、mulis获1993年诺贝尔化学奖。
1993年获诺贝尔化学奖
PCR的种类
& RT-PCR
(关于热启动，一般要求把反映体系加好后，最好立即开始反映，这时就要安排好时间，最好先把机器开好，等到85度以上，把体系加进去，这样就会防止引物2聚体！一般引物2聚体的形成温度为60度左右！超过了此温度就可有效防止其形成。）
& 反向PCR
& 不对称PCR
& 多重PCR
& 巢式RT-PCR
& 实时定量荧光PCR
PCR温度循环参数
变性(denature)温度和时间
模板DNA的变性：模板DNA双链在93-96加热2’-10’解离；经
PCR扩增形成的双链DNA在93-96°C 加热30”-1’。
退火(anneal)温度和时间: Tm-5°C
温度降至55C左右，特异引物与模板DNA单链配对结合。
延伸(extend)温度和时间： 72°C 1000碱基/分钟
在TagDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模
板，引物为起始点，按碱基配对原理合成一条新的复制链。
循环数
在25~30个循环内，扩增的DNA量增加明显，然后进入平台期。
靶序列的初始浓度越低，所需循环数越高。
PCR扩增效率（理论）
以上三步为一个循环。每一循环的产物可以作为下一个循环的模板，从理论上讲，每经过一循环，样本中的DNA量应该增加一倍，扩增DNA产量是以指数形式上升的，既n个循环后，产量为2n，经过25-30个循环后DNA可扩增106-109倍。
PCR扩增效率（实际）
实际上，PCR扩增效率比理论值要低。对于不同的基因来
说，扩增效率也大不相同。 (如图所示)
经过一定循环数之后，PCR产物的量增长缓慢，进入所谓的“平台期”，在PCR扩增反应达到平台期前，模板扩增产物(N)
与启始模板(N0) 之间呈下列方程所示关系:
N = N0  (1+E) n
其中E是扩增效率，
n是循环数。
演示PCR反应的过程！
PCR反应体系组成
（1） DNA模板
（2）引物
（3） dNTP
（4）耐热的DNA聚合酶
（5） 10×PCR缓冲液(含Mg++)
模板核酸
PCR可以以DNA或RNA为模板进行核酸的体外扩增。
RNA的扩增必须经逆转录成cDNA后才能进行正常的PCR循环，称为RT-PCR。
PCR反应中模板加入量一般为102-105个拷贝的靶序列。
人工合成的寡核苷酸-引物
PCR扩增产物的特异性和扩增片段的大小是由引物限定的，因此，引物的设计对PCR的成功与否有决定性的意义。