文档介绍：显微摄影技术和核型分析
目的与内容
(一)目的
、负片的冲洗方法以及底片的放大技术。
、形态与核型分析方法。
(二)内容
,冲洗、放大照片。
、形态,进行核型分析。
材料与用品
(一)材料
人淋巴细胞染色体分裂相玻片标本。
(二)用品
由学生根据实验需要自行准备。
操作与观察
(一)显徽摄影技术

(1)装上显微镜上的相机机身,打开照相机后盖,将35mm黑白胶卷片头齿孔与收片轴上的齿对好,盖上后盖,扳动收片轴,观察倒片轴是否跟随转动,如果不动,需要重装胶卷。按下快门(第1张底片已曝光)。
(2)显微镜观察人淋巴细胞染色体分裂相标本,选取所要拍摄的图像,调节标本移动器,使其位于视野中央。调节显微镜的细调焦螺旋使图像达到最清晰。
(3)将快门线旋在相机快门按钮上,扳动收片轴,上紧快门。
(4)把显微镜摄影接筒中的分光棱镜推拉杆拉出到位,使光路通向相机。
(5)曝光按下快门,按所需时间进行曝光。记录所拍摄的内容和拍摄条件备查。**拍摄前由教师进行试拍,确定大致的拍摄条件。
(6)拍摄完毕,取下相机,按下倒片按钮,按箭头方向旋转倒片轴,至猛然感觉阻力消失,则胶卷已倒人暗盒,打开相机后盖,取出胶卷。

(1)装罐将胶卷和显影罐放人暗袋,拉上拉链、按上按扣,以免漏光。双手伸人暗袋,打开暗盒。左手拿片芯,右手持胶卷边沿,在片芯上从内向外装片。装片时右手轻捏使胶卷成弓形便于装片,左手则缓缓逆时针方向转动,使胶卷卷入片芯的槽中,避免使胶卷粘贴在一起。然后将片芯装人显影罐,盖紧罐盖后打开暗袋,取出显影罐。**正式操作以前,可用废胶卷练习操作。
(2)显影将自来水从显影罐顶部罐口注人,轻轻摇晃,使胶卷药膜润湿,立即倒出水。从罐口倒入显影液,使显影液能浸没胶卷,轻轻摇晃,使胶卷药膜充分接触显影液。采用D-76显影液20℃需要显影12-18 min,而D-72显影液20℃需显影5 min。显影时间到后,立即倒出显影液。
(3)停显倒出显影液后,立即注人SB-1停显液,轻轻摇晃,处理10s,倒出停显液。
(4)定影倒出停显液后,立即注人定影液,不时轻轻摇晃。20℃定影15 min。
(5)水洗定影时间到后,打开显影罐,取出轴心,放人塑料盆中,流水冲洗30 min以上。
(6)晾干水洗完毕后,将胶卷取出、挂起、晾干,注意勿与尖锐物品接触,以免划伤药膜。
(在暗室中进行)
(1)将显影液D-72,停显液和定影液按顺序分别倒人各塑料盘中,各放1个竹夹,注意不要混用。在红光下,将放大纸剪切成合适大小。
(2)曝光将底片放人放大机的玻璃底片夹中,根据所需照片的尺寸,升降放大机机头,调节焦距使图像清晰。然后将红色滤色片转到镜头中央,挡住光线。取出裁好的放大纸压在放大尺下(光滑的药面向上),再移开红色滤色片,开始曝光。曝光时间预先需用小放大纸条试样后确定,可用定时器或默数数字的方法计时。
(3)显影曝光后,将放大纸放人显影液,在红光下用竹夹不时轻轻翻动像纸,注意观察影像的出现,影像完全出现后(在红光下需要稍深一些).取出,稍沥一下。
(4)停显显影完后,立即取出在停显液中晃动几下。
(5)定影停显后,转入定影液中定影15-20 min,此时可开灯观察效果。
(6)水洗流水冲洗30 min左右。
(7)上光将冲洗好的像纸稍稍沥干,将药膜面贴在上光机的上光板上,滚压,以免留下气泡,然后加热。上好光后,像纸会自动从上光板上脱落。如果用的是涂塑像纸,则不用上光,晾干压平即可。
(二)人染色体核型分析
,在显微镜下用油镜观察,选择分散好、形态好的中期染色体进行显微摄影,并将照片放大(方法同上)。
。
、臂比、着丝粒指数填入表23-1。
表23-1 染色体测量表
编号长臂短臂全长
相对长度臂比着丝粒指数
1
2
3
单倍染色体总长度=——————
主要观察染色体的长短、着丝点的位置、染色体臂的长短、有无随体等,其中以着丝点的位置最为重要。中期染色体中2个染色单体已分离,但着丝粒还未分开,2条染色单体相连于着丝粒。着丝粒为一淡染区,从着丝粒向两端是染色体的两臂,染色体被着丝粒分隔成短臂(p)和长臂(q)。根据着丝粒位置,可将染色体分为中部着丝粒染色体(m)、亚中部着丝粒染色体(sm)、亚端部着丝粒染色体(st)和端部着丝粒染色体(t)4种。(图23-1)。