文档介绍：DNA/RNA的琼脂糖凝胶检测
琼脂糖凝胶电泳和SDSPAGE凝胶电泳
2021/3/9
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凝胶电泳
分离长度
琼脂糖凝胶电泳
200bp—近50kb
聚丙烯酰胺凝胶电泳
5—500bp 分辨率高
采用不同浓度的凝胶可以分辨DNA分子的范围
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一、实验原理
电泳是现在用于分离和纯化DNA/RNA片段的最常用技术。当制备好的一块“胶”即一块包含电解质的多孔支持介质并把它置于静电场中，DNA/RNA分子将向阳极移动，这是因为DNA/RNA分子沿其双螺旋骨架两侧带有富含负电荷的磷酸根残基。
当DNA/RNA长度增加时，来自凝胶的阻力就会增加，不同长度的DNA/RNA片段就会出现不同的迁移率。因而就可依据DNA/RNA分子的大小使其分离
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含不同量琼脂糖的凝胶的分离范围
凝胶中的琼脂糖含量%(W/V)
DNA/RNA分子的分离范围(kb)

5—60

1—20

—10

—7

—6

—3
2
—2
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核酸染料
溴化乙锭（EB）是一种为芳香族类染料，当DNA样品在琼脂糖凝胶中电泳时，琼脂糖凝胶中的EB就插入DNA分子中形成荧光络合物，使DNA发射的荧光增强几十倍，电泳后就可直接紫外灯照射下检测琼脂糖中的DNA。
Godview吖啶橙类核酸低毒染料目前尚未发现具有致癌性。
Genegreen花青素母体为基础，苯环改良成链式结构的油性大分子，目前认为的最低毒的核酸绿色染料。
备注：一般将核酸染料加入loading buffer中可以减少污染及减少用量（1ml loading buffer ：10ul染料）。
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电泳缓冲液的组成
Tris—乙酸（TAE）
Tris—硼酸（TBE）
Tris—磷酸（TPE）
其浓度约为50mmoL/L，—,这些缓冲液均含有EDTA。这些缓冲液通常配制成浓缩液，贮存于室温。
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常用的电泳缓冲液的配制
缓冲液
使用液
浓贮存液（每升）
Tris—乙酸（TAE）
1×： Tris—乙酸
EDTA
50×：242g Tris碱
冰乙酸
100mL EDTA ()
Tris—磷酸（TPE）
1×： Tris—磷酸
EDTA
10×：108g Tris碱
85%磷酸
40mL EDTA()
Tris—硼酸（TBE）
× Tris—硼酸
EDTA
5×：54g Tris碱

20mL EDTA()
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加样缓冲液
缓冲液类型
6×缓冲液
贮存温度
I
%溴酚蓝
%二甲苯青FF
40%（W/V）蔗糖水溶液
4℃
II
%溴酚蓝
%二甲苯青FF
15%聚蔗糖水溶液
室温
III
%溴酚蓝
%二甲苯青FF
30%甘油水溶液
4℃
IV
%溴酚蓝
40%（W/V蔗糖水溶液）
4℃
V
（碱性加样缓冲液）
300m moL/L NaoH
6 mmoL/L EDTA
18%聚蔗糖水溶液
0．15%溴甲酚绿
0．25%二甲苯青FF
4℃
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加样缓冲液可以增大样品密度，以确保DNA均匀进入样品孔内，还可以使样品呈现颜色，从而使加样操作更为便利。
, 溴酚蓝在琼脂糖凝胶中移动的速率约与长300bp的双链线性DNA相同,而二甲苯青FF在琼脂糖凝胶中移动的速率则与4kb双链线性DNA相同。
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DNA片段长度标记
DNA片段长度标记通常叫