文档介绍：第四章 细胞拆合
真核细胞是由细胞核和细胞质两大部分组成的,细胞的正常生命活动都是在这两部分密切配合下进行的,两部分间有一定的相互关系,为了探明这种相互关系的机理,学者们创建了细胞拆合技术。
物理法
化学法
根据使用方法的不同,细胞拆合可以分为以下两种类型:
所谓细胞拆合,就是把核与质分离开来,然后把不同来源的细胞质和细胞核相互配合,形成核质杂交细胞。
第一节 物理法
最早使用的核质分离技术是用机械的方法或短波光把细胞核去掉。例如用微玻璃针或微吸管将原生动物或鱼类、两栖类甚至哺乳动物的卵母细胞的细胞核去掉。
还可使用紫外线或激光把细胞核破坏掉,形成去核的胞质体,然后用微吸管吸入其它细胞核,组成新的杂交细胞,进行培养实验。
核移植操作示意图
核移植操作流程图
两栖类的核移植
第二节 化学法
细胞松弛素B(cytochalasin B)有破坏微丝的作用。1967年Carter发现,细胞松弛素B能诱发体外培养的小鼠细胞排核。
至20世纪70年代初,Prescott用细胞松弛素B处理哺乳类细胞,并结合离心技术,可将细胞分拆为核体(karyoplast)和胞质体(cytoplast)两部分。
利用这种方法所得的胞质体,纯度可达90%以上,一次处理可获得较大量的胞质体。
由于核体外表包有1层细胞膜和少量胞浆,因而也称为小细胞(minicell)。在PEG或仙台病毒的介导下,核体可同另一胞质体融合,形成重组细胞(reconstituted cell)。重组细胞亦能合成RNA和进行细胞分裂。
为了把重组细胞与未去核的细胞区别开来,应先进行标记。将准备制取核体的细胞,用3H-嘧啶核苷标记核;而准备制取胞质体的细胞用小乳胶粒()标记细胞质(乳胶粒可被吞噬进入细胞质) 。
真正融合的重组细胞,核为3H标记,细胞质中含有乳胶粒。