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分类号: 学号:20101639
医学硕士学位论文
何首乌饮减轻 Aβ诱导的海马神经元
损伤作用机制的研究
学位申请人: 郭胜男
丁良教授
指导教师:
牛嗣云教授
学位类别: 医学硕士
学科专业: 药理学
授予单位: 河北大学
答辩日期: 二〇一三年五月
Classified Index: CODE:10075
.: NO:20101639
A Dissertation for the Degree of M. Medical Science
Study of the effect and mechanism of
Heshowuyin on alleviating the
Hippocampi neurons injury induced
by Aβ
Candidate: Guo Shengnan
Prof. Ding Liang
Supervisor:
Prof. Niu Siyun
Academic Degree Applied for: Master of Medicine
Specialty: Pharmacology
University: Hebei University
Date of Oral Examination: May, 2013
摘要
摘要
阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种常见的中枢神经系统退行性疾病,
随着当今世界人口的老龄化,AD 发病率日益增高,世界上有 3500 多万人患有阿尔茨
海默病,并且患者的死亡率日益增加,因此有关此病的研究成为国内外的热点之一。阿
尔茨海默病其病理特征表现为神经细胞内出现神经纤维缠结(过度磷酸化的 Tau 蛋白
是其主要成分)以及细胞外存在老年斑,且主要分布在前皮质和海马区。老年斑的主要
成分是 Aβ(β-淀粉样蛋白),是由β淀粉样前体蛋白(Amyloid prescursor protein APP)被β位
点 APP 裂解酶剪切所生成,Aβ是 AD 患者发病的和病程进展的主要因素,聚合态的 Aβ
可导致神经细胞凋亡。细胞凋亡是海马神经元损伤的主要因素,已有研究表明以何首乌
为主药组成的多种中成药对大鼠的学忆有保护作用,广泛用于抗衰老。但何首乌饮
对 Aβ诱导的海马神经元损伤的保护作用机制尚未见报道。
目的:
探讨何首乌饮对 Aβ诱导的大鼠原代培养海马神经元损伤保护作用及可能机制。
方法:
1. 采用新生 24 h 内的 SD 大鼠进行原代培养海马神经元
2. 将培养 10 d 的海马神经元分为以下五组:模型组:神经元培养 8 d 后,在培养液
中加入终浓度为 10 µmol/L 的 Aβ1-40 培养 48 h;何首乌饮保护组:神经元培养 6 d 后,
在培养液中加入 10%的何首乌饮含药血清,预处理 48 h,再加入终浓度为 10 µmol/L 的
Aβ1-40 培养 48 h;何首乌饮治疗组:神经元培养 6 d 后,再加入终浓度为 10 µmol/L 的
Aβ1-40 培养 48h,再在培养液中加入 10%的何首乌饮含药血清,处理 48 h;何首乌饮对
照组:神经元培养 8 d 后,10%的何首乌饮含药血清培养 48 h;空白对照组:神经元培养
10 d,不做任何处理。
3. 采用台盼蓝染色观察海马神经元存活率的变化:死细胞被染成蓝色,活细胞不着
色,用未染色活细胞总数在总细胞数中所占百分比来评价何首乌饮对 Aβ诱导的海马神
经元存活率的作用。
4. 采用 Hoechst33258 染色观察海马神经元的凋亡率:海马神经元培养 10 d 后进行
I
摘要
Hoechst33258 染色,在荧光显微镜下观察细胞的核染情况,随机选取 10 个视野,计数
细胞凋亡率。
5. 检测各组海马神经元 Trx1 的表达情况:免疫组化染色观察 Trx1 的表达;用
RT-PCR 检测各组 Trx1 的 mRNA 表水平,并用 Western blot 检测各组 Trx1 蛋白的水平。
结果:
,胞体大,边界
清楚,突起长,分枝连接呈网状;与正常组比较,模型组细胞贴壁不牢,失去原有形态,
胞体肿胀,细胞膜破裂,周围有许多细胞碎片,突起大部分断裂成断线状;何首乌饮治
疗组和预防组细胞状态与模型组相比较神经元的胞体较为完整,大部分细胞有突起,且
突起间有联接。

(P<)