文档介绍:糖的滤纸层析试验汇报
篇一:纸层析法分离氨基酸试验汇报
序言
纸层析法 纸层析法又称纸色谱法,是现在广泛应用的一个分离技术。。现在层析法已成为生物化学、分子生物学及其它学科领域有效的分离分析工具之一。它是一个以纸为载体的色谱法。固定相通常为纸纤维上吸附的水分,流动相为不和水相溶的有机溶剂;也可使纸吸留其它物质作为固定相,如缓冲液,甲酰***等。将试样点在纸条的一端,然后在密闭的槽中用适宜溶剂进行展开。当组分移动一定距离后,各组分移动距离不一样,最终形成相互分离的斑点。将纸取出,待溶剂挥发后,用显色剂或其它适宜方法确定斑点位置。依据组分移动距离(Rf值)和已知样比较,进行定性。用斑点扫描仪或将组分点取下,以溶剂溶出组分,用适宜方法定量(如光度法、比色法等)。
纸层析法(paper chromatography)是生物化学上分离、判定氨基酸混合物的常见技术,可用于蛋白质的氨基酸成份的定性判定和定量测定;也是定性或定量测定多肽、核酸碱基、糖、有机酸、维生素、抗菌素等物质的一个分离分析工具。纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法,其中滤纸纤维素上吸附的水是固定相,展层用的有机溶溶剂是流动相。
在环境分析测试中,有时用纸层析法分离试样组分,它用于部分精度不高的分析,如3,4-苯并芘。但不如GC、HPLC应用普遍。在
做叶绿体色素分离时用到,将叶片碾碎,浸出绿色液体,将液体和层析液(石油醚)混合,将滤纸一段进入混合液体,四种色素在层析液中的溶解度不一样,在滤纸上留下4条色素带。由此观查出多种色素的相对含量和种类。
纸层析法通常用于叶绿体中色素的分离,叶绿体中色素关键包含胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a、叶绿素b,它们在层析液中的溶解度不一样,溶解度大的随层析液在滤纸上扩散地快,反之则慢;含量较多者色素带也较宽。最终在滤纸上留下4条色素带,因此利用纸层析法 能清楚地将叶绿体中的色素分离。
图1 叶绿素的分离
氨基酸 氨基酸是组成蛋白质的基础单位,广泛用于食品、医药、添加剂及化妆品行业。伴随生物工程技术产业的发展逐步成为2l世纪全球的关键产业之一,氨基酸的需求量越来越大,品种变更越来越快,工艺改革越来越新。现在全世界氨基酸每十二个月的产量为100万吨,而需求总量是800万吨。中国自20世纪60年代起,氨基酸的应用在食品工业占61%,在饮料工业占30%,医药、日用化工、农业、冶金、环境保护、轻工、生物工程技术等方面占用的百分比逐年增加。
氨基酸在人类生活的很多方面全部有着应用:
(1)在食品行业的应用
(2)在医药工业的应用
(3)在饲料添加剂行业的应用
(4)在化妆品行业的应用
(5)在农业上的应用
(6)在其它行业的应用
氨基酸工业还有着宽广的发展前景:
(1)传统的氨基酸生产方法
(2)利用基因工程手段生产氨基酸
(3)大力发展药用中间体,详细为:
①氨基酸及其衍生物逐步成为药用中间体
②非天然氨基酸是合成活性药品的主要原料
③生产高附加值的非天然氨基酸
一、试验目标
(1)掌握分配层析的原理,学****氨基酸纸层析法的操作技术(包含点样、平衡、展层、显色)。
(2)学****未知样品的氨基酸成份(水解、层析及判定)分析的方法。
二、试验原理
(1)纸层析是以滤纸为惰性支持物的分配层析。滤纸纤维上的羟基含有亲水性,吸附一层水作为固定相,有机溶剂为流动相。当有机相流过固定相时,物质在两相间
不停分配而得到分离。
(2)溶质在滤纸上的移动速度用比移值Rf值表示。
(3)Rf=原点到层析斑点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离。
(4)在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。Rf值的大小和物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等原因相关。本试验利用纸层析法分离氨基酸。材料和方法
三、试验装置和试剂
(1)氨基酸标准液(1mg/ml)
亮氨酸、甘氨酸和脯氨酸标准液。
(2)80%甲醇
(3)%茚三******溶液
(4)氨基酸混合液(每种氨基酸500mg/mL)
(5)正丁醇
试验仪器
(1)新华滤纸×1
(2)培养皿×1
(3)电热鼓风干燥箱×1
(4)吹风机×1
(5)毛细管×4
(6)针、线、尺×1
(7)钟罩(高约430mm,直径约290mm,具磨口塞)×1
试验操作
(1)滤纸
选取国产新华 1号滤纸, 6cm×7cm。在距滤纸2cm