文档介绍：第四章基因操作 Gene manipulation
第一节碱基互补的能力
一、DNA的热变性
-C含量高的DNA具有较高的熔解温度,可以根据熔解温度的不同将GC含量不同的DNA分子分开,并可推测DNA分子中G-C的相对含量。
。组蛋白是与核DNA结合的碱性蛋白,富含精氨酸,其编码区相对富含G-C对。
海胆组蛋白基因在较底温度时(61℃)的变性电镜图,每种组蛋白基因被一个富含A-T对区域间隔开。用S1核酸酶处理,消除单链。
H1
H2A
H3
H2B
H4
二、互补单链的复性
利用互补单链复性的特点可以确定基因缺失的位置和大小:一个缺失突变体的DNA和一个野生型的DNA一起复性后就可确定缺失区。
a b c d e
a, b, c, d, e,
a b d e
a, b, d, e,
a b c d e
a, b, c, d, e,
a b d e
a, b, d, e,
a b
c
d e
a, b, d, e,
Heat
Mix and cool
三、染色体上DNA序列的定位
用特异性RNA或DNA作探针与染色体上相应的DNA互补区域作杂交,从而确定该特异性基因的位置称染色体原位杂交(in situ hybridization of chromosome)。
In situ hybridization of human metaphase chromosomes using fluorescent technique
(FISH)
第二节限制性内切酶
一、宿主限制现象
X
X
A
B
X-A
X-B
A
B
A
B
X-A
X-B
X-A
X-B
100%
100%
%
100%
Phage
Infect
Bacteria
从两个不同菌株A和B来的噬菌体X具有不同的感染能力
X-A
A
X-A
B
X-B
A
X-A
100%
100%
很差
无法分离到能感染A细菌的X-B来的噬菌体
用很少一些感染力差的
结果说明:噬菌体的宿主范围取决于它所来源的细菌菌株,而不是噬菌体的基因型;宿主的基因型对噬菌体有一种修饰作用,但并不改变噬菌体DNA的序列。细菌的基因型决定该细菌对各种噬菌体感染的敏感性,一种噬菌体的基因型决定它所能感染细菌的范围,它们之间具有密切的依赖和限止关系。
在不同基因型的细菌中生长的噬菌体其具有不同的感染能力